冻干粉初溶：0.2 mg/mL 是聚集临界点

IL-1ra 单体的疏水 β-折叠面在 0.2 mg/mL 以上极易形成可逆二聚，动态光散射显示 90 nm 颗粒峰。初次溶解用 10 mM 柠檬酸 pH 3.0 把浓度压到 0.1 mg/mL，再分装 50 μL/管，?80 °C 一次冻融，活性损失 <3 %。

缓冲液替换：pH 6.5 让蛋白最松弛

晶体结构显示 His34 咪唑基在 pH 6.5 质子化，表面电荷 +3，分子间排斥最大。用 1 kDa 超滤离心 3 次置换到 20 mM 组氨酸-150 mM NaCl pH 6.5，24 h 内聚集体 <1 %；若用 PBS pH 7.4，12 h 出现 5 % 二聚体，EC50 漂移 15 %。

载体选择：0.05 % CHAPS 替代 BSA

传统加 0.1 % BSA 防止吸附，BSA 会结合 IL-1RI，拮抗实验背景抬高。0.05 % CHAPS 临界胶束 8 mM，单体形式不占据受体，A280 背景仅 0.02，ELISA 空白值下降 40 %。

分装体积：50 μL 管减少蒸发残量

?80 °C 冰箱开一次门，湿度下降 20 %，100 μL 管液面年蒸发 3 μL，浓度虚高 3 %。50 μL 管蒸发 1 μL，误差压到 2 % 以内。用 0.5 mL 低吸附管，离心 3 s 把壁液集中到管底，再压盖，冻存 18 个月 CV <5 %。

冻融限速：37 °C 水浴 45 s 完成

37 °C 水浴 45 s 冰块刚好消失，继续温育会让局部温度升到 25 °C，聚集体从 1 % 升到 4 %。融化立即放 4 °C，24 h 内用完；若需二次冻存，加 10 % 甘油，活性损失可压到 6 %。

浓度核验：OD280 消光系数 0.65 mL·mg?1·cm?1

IL-1ra 不含 Trp，ε280 仅 0.65，传统 1 cm 光程读数误差大。用 NanoDrop 0.5 mm 光程，读数 0.13–0.65 AU，线性 R2 = 0.999；低于 0.1 mg/mL 时改用 2 mm 通路，保证读数 >0.02 AU，浓度误差 <3 %。

使用时效：4 °C 72 h 活性 cliff

体外受体拮抗实验显示，4 °C 存放 72 h 后，IL-1ra 抑制 IL-1β 诱导的 IL-6 释放效率由 98 % 降到 78 %。实验室 SOP 写“4 °C 48 h 内用完，余液弃”，可避免数据跳点。

废液处理：pH 3 柠檬酸灭活 10 min

IL-1ra 在 pH 3.0 37 °C 10 min 后 Trp49 氧化，活性降到 5 % 以下。实验结束把残液调回 pH 3，室温放置 10 min 再倒掉，生物危害降为最低，符合 NIH 化学安全规范。