完整分子量：16 kDa 里的 146 个氨基酸

Leptin 由 146 个氨基酸组成，理论分子量 16.15 kDa，SDS-PAGE 还原条件下迁移 16 kDa 为合格。出现 14 kDa 条带说明信号肽未完全切除，活性 ED50 会从 0.5 ng/mL 掉到 2 ng/mL。到货跑 15 % 分离胶，一条带原则＞ 95 %，否则退货。

活性单位换算：NIBSC 97/594 每支 4000 IU = 8 μg

WHO 参比品 97/594 标定 4000 IU/支，对应 8 μg Leptin，换算 1 IU = 2 pg。体外 BAF/3-LEPR 实验 ED50 0.3 ng/mL，活性 ≥ 1.2 × 10? IU/mg 为合格。低于 8000 IU/mg 的批次直接淘汰，别花时间优化细胞状态。

糖型占座：E.coli 无糖版半衰期 0.6 h

CHO 表达 Leptin 在 Asn78 带 70 % 复杂型糖，小鼠半衰期 2.1 h；E.coli 无糖版 0.6 h。急性能量代谢实验选无糖，成本低 30 %；做长期体重监测选糖基化版，减少频繁注射。目录不写糖型，索要 LC-MS 糖谱，给不出就换品牌。

内毒素红线：0.05 EU/μg 是小鼠脑室注射底线

Leptin 中枢注射总量 1 μg，内毒素 0.1 EU/μg 时小鼠 2 h 体温升高 0.8 ℃，POMC 神经元激活被掩盖。要求重组 C 因子法 ≤ 0.05 EU/μg，比凝胶法贵 20 美元，一次通过动物实验，省 20 只小鼠。

聚集体阈值：SEC-HPLC 主峰 ≥ 97 %

Leptin 疏水核裸露，37 ℃放置 24 h 聚集体升到 10 %，活性掉 60 %。到货立即跑 SEC-HPLC，主峰 < 97 % 直接退货。储存缓冲液加 0.2 M 精氨酸，聚集体月升率 < 1 %，活性维持 95 % 以上。

冻干 VS 液体：冻干复溶损失 3 %，液体反复冻融损失 40 %

冻干品用 10 mM HCl + 0.1 % CHAPS 复溶，损失 3 %；液体品 –80 ℃冻融 3 次，聚集体升到 15 %，活性掉 40 %。长期储存选冻干，一周用完选液体，别图方便买大包装液体，用不完就是浪费。

受体结合常数：LEPR 结合 KD 0.12 nM

SPR 实测 Leptin 与 LEPR 结合 KD 0.12 nM，高于 0.3 nM 批次的细胞活性 ED50 同步升高。要求厂商附 SPR 传感图，KD > 0.3 nM 直接淘汰，避免买到“高亲和假货”。

氧化失活：Met54 被氧化后活性掉 70 %

Leptin 的 Met54 位于受体结合面，氧化后形成亚砜，ED50 从 0.5 ng/mL 升到 1.7 ng/mL。储存液加 0.5 mM 甲硫氨酸，4 ℃放置 30 天活性无衰减。到货做 LC-MS 氧化肽段扫描，Met54 氧化率 > 5 % 就退货。

包装规格算法：100 μg 小包装最省

体外实验 EC50 0.3 ng/mL，96 孔板每孔 100 μL 只需 0.03 ng，100 μg 可跑 3 万块孔，价格 150 美元。1 mg 大包装单价比小包装便宜 25 %，但复溶后 4 ℃只能放 14 天，用不完报废。按通量下单，小包装反而便宜。

运输温度盲区：干冰运输导致蛋白表面冻伤

Leptin 液体走干冰，温度 –78 ℃，表面水分子升华，形成玻璃态微裂纹，复溶后聚集体升到 5 %。选常温运输冻干款，聚集体 < 1 %，活性无差异。急着要货选干冰，到货立即测 SEC-HPLC，聚集体 > 3 % 就让厂商签赔偿协议。

售后响应红线：48 h 内提供 COA、SEC-HPLC、SPR 图

下单前把“48 小时内提供 COA、SEC-HPLC、SPR 传感图”写进合同，超时扣 10 % 货款。厂商普遍能答应，真超时邮件催一次，附件当天就到。没写进合同，催三次才给，实验窗口已被耽误两周。