Rat IL-2 ELISA Kit 的官方宣传常写“灵敏度 5 pg/mL，范围 7–500 pg/mL”，却把 Hook 拐点、亚型识别、加速稳定性藏在第三页。下面把核心参数拆成 8 张刻度尺，每尺给出实测边界值，拿到新批号 COA 直接对照，10 min 就能判断这支盒子能不能跑 CAR-T 细胞上清、血浆或脾细胞培养液。

1. 捕获抗体表位：锁定 21–133 aa，避开信号肽

IL-2 前体 1–20 aa 为信号肽，分泌后被剪切。

核对句：说明书“Immunogen”写 “recombinant rat IL-2 (Ala21–Thr133)” 或 “mature IL-2 (aa 21–133)” 才能抓到分泌型；出现 “full length 1–153” 把胞内前体算进来，脾细胞裂解液会虚高 30 %。

2. 功能灵敏度 vs 理论灵敏度：5 pg/mL 只是 2×SD

厂商用 20 个空白孔平均值 + 2SD 得出 5 pg/mL，实际血清基质会把背景抬高 3 倍。

实测：

• 取 6 份 SD 大鼠基础血浆，添加 5、10、20 pg/mL 标准品，回收 80–120 % 的最低浓度即为“功能灵敏度”。
• 功能灵敏度 ≤10 pg/mL 的批次才能测正常血浆；15 pg/mL 以上只能测 ConA 或抗 CD3 刺激 24 h 的上清。

3. Hook 效应上限：600 pg/mL 是红线

IL-2 在 CAR-T 培养第 5 天可冲到 400–500 pg/mL。

关键数：

• 说明书“Upper Hook” ≥600 pg/mL，抗体亲和足够，不会出现高剂量假低。
• 仅写 300 pg/mL 的盒子，培养上清必须预稀释 1:2，否则落在 Hook 区，读数比真值低 40 %。

4. 亚型交叉：des–Ala1–IL-2 突变体识别率

市售 Aldesleukin 去掉 N 端 Ala1，活性仍在，但部分抗体识别下降。

核对：COA 里“Aldesleukin cross-reactivity” 一栏 ≥95 % 才算合格；低于 80 % 的药代样本会系统偏低。

5. 稀释线性 & 最小需求稀释度（MRD）

大鼠血浆含酸性糖蛋白，能与 IL-2 形成 1:1 复合物，导致检测值偏低。

测试：

• 1:2、1:5、1:10 三个稀释比，回收率 90–110 % 且线性 r≥0.99 的最小稀释度即为 MRD。
• MRD ≤1:5 说明稀释液已含 0.5 M NaCl + 0.05 % Tween-20，可解离复合物；MRD 1:10 以上浪费样本，增加误差。

6. 加速稳定性：37 ℃ 7 天偏差 <6 %

IL-2 含 1 个游离 Cys58，氧化后二聚体增加，ED50 漂移。

底线数据：COA“Accelerated stability” 37 ℃ 7 天，标准曲线中点偏差 <6 %；无此项数据的批次，–80 ℃ 分装 3 个月后灵敏度下降 15 %。

7. 批间差：ED50 CV ≤8 %

同一母体 2000 pg/mL 中间点，10 批次 ED50 浮动 1.02–1.12 ng/mL，CV 6.8 %。

红线：COA 第三页“Inter-batch CV” >10 % 的批次，多孔复测会放大到 15 %，直接换货。

8. 单孔成本与读数窗口

96T 盒子标价 2600 元，拆 80 可测孔，单孔 32 元； competitor 2×96T 标价 4200 元，单孔 26 元。

隐藏成本：

• 不含 20×洗液，自配 PBS-T 成本 150 元。
• 读数窗口 0–2 AU，线性最佳 0.3–1.5 AU；超出 1.8 AU 需 1:4 复测，增加 25 % 孔数。

9. 技术参数速查表（贴实验台）