01 检测下限：官方 7 pg/mL 怎么压到 2 pg

KET7013 说明书 LLOD 7.8 pg/mL，LLOQ 15 pg/mL。

实验室把样本量从 100 μL 提到 150 μL，S/B 由 2.1 提到 3.4，背景 OD 450 仍维持 0.028。

再加 0.01 % 硫柳汞抑制血清背景过氧化物酶，信噪比再涨 25 %，20 次重复 2 pg/mL 浓度 CV 9 %，满足药代 double-digit 要求。

02 上限 Hook：> 6 000 pg/mL 出现假低，如何提前预警

IL-22 在 DSS 结肠炎血清峰值 5 800 pg/mL，Hook 起始点 6 000 pg/mL。

预实验把 10 000 pg/mL 标准掺入样本，1:10 稀释后值 ×10 与 1:100 不成线性即判定 Hook。

把报告上限锁 5 000 pg/mL，超过自动报 "> 5 000"，不再稀释，省样本与二次跑板时间。

03 交叉矩阵：IL-10 家族同源性 24 %，实测交叉 < 0.1 %

IL-22 与 IL-10、IL-19、IL-24 同属 α 螺旋束，序列同源性 20–30 %。

抗体对 8E11 识别 IL-22 螺旋 D 段 131–144 aa，IL-10 对应段仅 3 个相同残基，亲和力差 400 倍。

1 000 pg/mL IL-10 掺入，实测 OD 等价 0.6 pg/mL IL-22，交叉 0.06 %，直接把图贴补充材料，审稿人零追问。

04 稀释线性：1:2 与 1:8 回收率差 15 %，原因在可溶性受体

血清里 sIL-22Rα1 浓度 0.5–2 ng/mL，与 IL-22 形成复合体，稀释后解离，出现“越稀释越高”假线性。

用 0.5 % Tween-20 预稀释，解离复合体，1:2、1:4、1:8 回收率 97 %–103 %，R2 0.999，一条直线跑到底。

05 板间 CV：烘干湿度 45 % RH vs 65 % RH 的差异

链霉亲和素预包被后烘干，45 % RH 16 h 板间 EC50 漂移 4 %，65 % RH 漂移 11 %。

厂家在洁净室加除湿机，维持 45 % RH，每批次留 3 块板做 12 条标曲，CV 2.8 %，COA 随盒附原始数据，用户收到无需再验证。

06 校准品溯源：NIBSC 16/170 编码写进 COA

国际标准品 16/170 10 000 IU/mL，KET7013 标准品 250 pg/mL 可溯源。

COA 列出：

• 母批号
• IU 赋值
• 稀释方程

缺一项即视为无溯源，批次间差可达 25 %，投稿时被要求补实验，耽误 2 周。

07 稳定性外挂：?80 °C 冻融 3 次活性降 < 6 %

标准品 50 ng 装 0.5 mL 螺帽管，?80 °C 速冻 1 h → 液氮 10 min，玻璃化后 37 °C 45 s 溶解，三次循环活性保留 94 %。

常规 ?80 °C 慢速冻融一次降 7 %，三次后掉 20 %，直接报废。

把冻融记录写在管壁，超 3 次红线淘汰，避免数据漂移。

08 384 通量：25 μL 微球版保持 3 pg/mL 灵敏度

抗体对搬到 0.8 μm 磁珠，表面积 4 m2/g，反应动力学与 96T 持平。

激光读数用 638 nm 激发，APC-链霉亲和素，检测限 3 pg/mL，CV 6 %，日通量 1 500 例，单孔成本 4.5 元，比 96T 降 50 %，适合大规模药效评价。