01 灵敏度极限：官方 3 pg/mL 如何再砍一半

KET7010 给定的 LLOD 是 7.8 pg/mL，LLOQ 15 pg/mL。

实验室把样本体积从 100 μL 加到 150 μL，TMB 显色时间 20 min，背景 OD 450 控制在 0.025，信噪比 3:1 对应的浓度降到 3 pg/mL。

再加 0.02 % 硫柳汞抑制血清背景酶，S/N 再提 30 %，实测检测下限 1.5 pg/mL，重复 20 次 CV 8 %，满足药代试验 double-digit 要求。

02 动态平台：一条 7 点曲线怎样盖住 1–2 000 pg/mL

IL-10 在 LPS 急性模型血清里 0 h 约 8 pg/mL，6 h 峰值 1 400 pg/mL。

把最高标曲点设在 2 000 pg/mL，顶部平台保留 10 % 余量，样本超上限用稀释液 D 1:4 预稀释，回收率 96 %–104 %。

四参数拟合 R2 0.998，EC50 落在 68 pg/mL，与文献值 65 pg/mL 偏差 4 %，投稿时直接把参数表贴补充材料，reviewer 无追问。

03 交叉矩阵：IL-10/IL-10R 复合物不会骗走真值

血清里可溶性 IL-10Rα 浓度 50–300 ng/mL，理论上可捕获 IL-10 形成复合体。

实验把 1 000 pg/mL IL-10 与 500 ng/mL sIL-10Rα 预孵育 30 min，再上机，实测值 1 020 pg/mL，偏差 2 %。

抗体对 JES5-2A5 识别表位 62–74 aa，受体结合域在 34–56 aa，空间位阻让复合体无法同时被捕获与检测，天然样本无需酸解离，省一步操作。

04 精密度边界：板内 CV 2 % 的工厂级设定

预包被板烘干后 25 °C 存放 7 天，吸附均一性决定板内 CV。

厂家把链霉亲和素包被缓冲液离子强度调到 50 mM，pH 7.4，烘干曲线 25 °C 45 % RH 16 h，条间差 0.006 OD。

用户端用 350 μL/孔洗液，残留体积 1.8 μL，背景一致，零孔 CV 稳在 2 %，直接写进 SOP，审计官现场抽 3 块板都达标。

05 溯源链路：NIBSC 93/722 如何落到 96 孔板

KET7010 标准品赋值 250 pg/mL，溯源路径：

NIBSC 93/722 (5 000 IU/mL) → 1 000 IU/mL 用 1 % BSA-PBS → 100 pg/μL 用 0.5 % 胎牛血清 → 250 pg/mL 用含 0.05 % Proclin 300 稀释液。

每步用 1 mL 低吸附管，液体挂壁 < 0.6 μL，整体不确定度 2.8 %，证书随盒附 PDF，投稿时把编号写进方法段，编辑部一键接受。

06 加速老化：45 °C 7 d 模拟 12 个月运输

试剂盒 45 °C 放置 7 d，标准品活性下降 8 %，EC50 偏移 5 %，仍在 ±10 % 接受范围。

捕获抗体板经加速后吸附效率降 3 %，背景升高 0.005 OD，用空白扣减即可抵消。

用户收到盒先跑 QC 样本，偏差 > 10 % 直接退单，物流责任由厂家承担，运输风险零转移。

07 高通量扩展：384 孔微球版保持 3 pg/mL 灵敏度

把抗体对搬到 0.5 μm 羧基磁珠，体积缩到 25 μL，反应表面积 3.2 m2/g，动力学与 96T 持平。

激光读数用 638 nm 激发，APC 标记链霉亲和素，检测限 3 pg/mL，CV 6 %，一块板 384 例，日通量 1 500 例，适合疫苗临床。

单孔成本 5 元，比 96T 降 40 %，药企一次订 5 万孔，厂家返 10 % 折扣，直接冲年度预算。