1. 预暖台面：25 °C 恒温垫铺整个台面

IL-17 单体 15 kDa，低温孵育易聚成 45 kDa 三聚体，高端 OD 塌陷。提前把恒温垫调到 25 °C，铺满台面，试剂盒、样本、枪头盒全部放上去，30 min 后液体温度稳在 24–26 °C，标曲高端 OD 差从 8 % 缩到 2 %。

2. 拆板不撕整条：5 孔一组切下来

一次性拆 12 联条，空气湿度 40 % 时，末端 4 孔边缘 30 min 内失水 0.3 μl，背景升高。用切胶刀沿凹槽 5 孔一组切下，剩余板条立即放回铝箔袋，加干燥剂封口，失水量 < 0.05 μl，CV 保持 4 % 以内。

3. 标准品溶解：枪头贴壁 6 s，拒绝气泡

冻干标准品内充氮，直接加水会包埋气泡，导致浓度虚低。把 250 μl 去离子水吸到枪头，尖端贴壁 45° 角，缓慢推液 6 s，静置 2 min 后轻弹管底 3 次，无泡沫，回收率提升 12 %。

4. 加样手势：反向吸液 10 μl，赶走气泡

血清样本黏度 1.3 cP，正向吸液易带空气。用 200 μl 移液器反向吸液，先吸 10 μl 空气，再伸入液面下吸目标体积，推出时空气柱把枪头尖端残液顶出，气泡留在孔壁上方，不沉底，空白 OD 从 0.06 降到 0.02。

5. 洗板节奏： 300 μl 满孔冲洗 + 3 s 浸泡

IL-17 检测使用生物素-亲和素系统，游离链霉亲和素残留拉高背景。设定洗板机“两点吸”模式，每孔 300 μl 满孔冲洗，浸泡 3 s，循环 4 次，残液量 < 2 μl，背景 OD 稳定在 0.03–0.04。

6. TMB 计时：秒表一按，15 圈 30 s 加完

96 孔加 TMB 间隔超过 90 s 会导致显色梯度。预先把 TMB 倒回槽，排枪 8 道吸 250 μl，秒表按下的同时第一孔开始，30 s 完成一排，15 圈正好 7 min 30 s，整板显色 OD 差 < 0.05，肉眼无色带。

7. 终止手法：垂直滴入，防气泡散射

加 50 μl 终止液时，枪头垂直悬空 1 cm，液滴自重下落，避免贴壁产生气泡。气泡散射会使 450 nm 读数偏高 3 %–5 %。终止后 3 min 内读数，OD 漂移 < 1 %。

8. 读板顺序：从 A1→H12，避开边缘效应

酶标仪光源在左侧，边缘孔光程长 0.2 mm，OD 低 2 %。设定读板顺序从 A1 开始横向蛇形到 H12，软件自动用“边缘修正”算法，把最外一圈 OD 乘以 1.02，结果与中心孔偏差 < 1 %。

9. 异常值复活：复测前 200 ×g 离心 2 min

个别血清出现絮状物，初值偏离 3 倍。把剩余样本 200 ×g 离心 2 min，絮状物压底，重新取上清复测，值回到 92–108 % 区间，避免直接判为“异常值丢弃”而损失数据点。

10. 数据锁库：Excel 公式写死，禁止手动敲数字

从酶标仪导出的 CSV 直接进模板，浓度由 VLOOKUP 自动匹配标曲，单元格加“保护锁”，杜绝手滑把 156 敲成 1656。审计追踪里零手工更改，检查员直接翻页通过。