1. 抗体对表位：N 端 6–15 与 30–39 组合，避开蛋白酶剪切区

• IL-8 血清半衰期 8 min，N 端 1–5 易被弹性蛋白酶切掉
• 捕获抗体 clone 8A2 锁定 6–15，检测 clone 4D6 落在 30–39，两段均远离蛋白酶位点，脓毒血症样本回收率 92–108 %
• 说明书未给出表位区间，直接索要 peptide mapping，无报告默认用全长亲和，假高 20 %

2. 功能灵敏度：0.4 pg/mL 是注册检及格线

• “< 2 pg/mL”只是零标准+2SD，CDE 要求 60 例真实血清假阳性 ≤ 1 例
• 让厂家提供 3 批次、3 天、3 台酶标仪原始 OD，功能灵敏度稳定 0.4 pg/mL 才能写进性能评估表

3. 交叉反应写到 100 ng/mL，缺浓度上限视为无效

• IL-8 与 CXCL1、CXCL3 共用 ELR motif，同源性 34 %
• 参数表必须写明“CXCL1 100 ng/mL 交叉 < 0.03 %”，缺浓度上限的声明被审评视为无效，发补 100 %

4. 标准品溯源：WHO 2nd IS 89/520 换算 1.8 IU/pg

• 89/520 活性 1 000 IU/ampoule，继任品 20/104 活性 1 300 IU/ampoule
• 试剂盒把每 1 pg 校准品标注 1.8 IU，临床实验室可直接 IU 上报，溯源链写进“性能评估表”第 4.2 栏，审计零提问

5. 样本体积 50 μL，稀释倍数 1:2 起步，省样也省钱

• POCT 场景采血量常 < 100 μL，25 μL 直接加样基质 HAMA 效应放大 2 倍
• 参数表写明“50 μL 血清，1:2 稀释，回收率 90–110 %”，背景 OD 从 0.12 降到 0.04，信噪比提升 3 倍，单孔成本降 30 %

6. 板间差：斜率 a 值差异 < 4 %，附 10 批 COA 折线图

• 四参数斜率 a 比末端 CV 更能反映抗体活性漂移
• 让厂家把 10 批 COA 的斜率 a 做成折线图附在 IFU 附录，审评员一眼判稳定，省去 40 例血清桥接实验

7. 运输温控：-20 °C 干冰，箱内温度记录仪 PDF

• IL-8 抗体对反复冻融一次活性下降 12 %
• 索要全程温度记录仪数据，-20 °C 漂移 < 2 °C 的批次才签字收货，冰袋运输直接退货，避免 5 % 标准品漂移

8. 读数校准：450 nm 滤光片中心波长偏差 ≤ 2 nm

• TMB 450 nm 峰宽 30 nm，滤光片 448 nm 与 452 nm 相比 OD 差 8 %
• 每季度用 NIST 可追溯 OD 1.0 标准玻片校准，偏差 > 2 nm 立即更换滤光片，多中心数据差从 8 % 降到 1 %

9. 售后支持：数据诊断 Excel 模板 24 h 内返回

• 靠谱厂家附带 Excel 模板，自动计算回收率、平行性、Hook effect
• 发邮件 24 h 内收到修正后的四参数曲线和可疑样本标记，比便宜 200 元更有价值

10. 文献背书：IF>3 的 paper 至少 3 篇，货号必须出现

• 让销售提供近三年内使用同款 Kit 发表的 SCI 原文，IF>3 的至少 3 篇，文中材料部分必须写明货号与批次
• PubMed 检索“Human IL-8 ELISA Kit + 货号”返回 0 篇，直接换供应商