开箱后首次校准

KET6005 运输过程允许 2–8 °C 波动 72 h。实验员习惯直接上机，背景 OD 常升高 0.02。正确流程：取出微孔板，置于 25 °C 恒温 30 min，让包被抗体恢复构象，再使用零点校准品复测，空白值可降至 0.035 以下。该步骤写入 SOP，能延长板条使用周期 10 %。

洗板机日常防堵

EGF 检测采用 50 μL 小体积孵育，纤维蛋白原易沉积于针头。每日实验结束执行 0.5 % 次氯酸钠浸泡 10 min，继以去离子水冲洗 5 循环，可保持流量误差 < 2 %。每周拆下洗头，超声清洗 5 min，频率 40 kHz，针头内径 0.3 mm 无损伤。堵塞率由每月 3 次降至 0 次。

标准品冻融循环上限

重组人 EGF 含 0.1 % BSA 保护剂，?70 °C 保存。实测冻融 5 次后活性下降 8 %，第 6 次下降 25 %。把原装 1000 pg/mL 标准品按 50 μL 分装于低吸附管，一次性使用，可避免反复冻融造成的标准曲线斜率漂移。

酶标仪光路维护

HRP 底物 TMB 在 450 nm 读数，灯源老化后能量下降 30 %，高值孔出现 2.8 OD plateau。设定季度光强检查：放入中性滤光片 OD=1.0，读值偏差 > ±0.05 即更换卤素灯。灯源价格约占仪器 1 %，拖延更换会导致低值样本假阴性。

湿度控制与板条封存

EGF 浓度在泪液中低至 5 pg/mL，实验常拆 8 条、余 8 条。剩余板条放入铝箔袋，加 2 g 分子筛干燥剂，封口后 4 °C 竖直存放。湿度 > 60 % 时，抗体层水膜形成，信号 48 h 内下降 15 %。铝箔袋外套密封盒，盒内放电子湿度卡，指针 > 50 % 立即更换干燥剂。

故障排查速查表

年度性能验证

参照 CLS EP-12-A2，选取 3 个浓度：5、50、500 pg/mL，每月复测 4 块板，累计 12 个月。绘制 Shewhart 图，±2 SD 为预警，±3 SD 为失控。连续 2 点位于同侧 2 SD 外，即启动校正程序。年度 CV 可控制在 5 % 以内，满足科研论文与临床备案双重要求。

软件备份与审计追踪

试剂盒自带 Excel 模板含宏公式，误删后曲线拟合参数丢失。每月把模板另存为 .xlsm 备份，存放于网络驱动器，设置只读权限。酶标仪 PC 打开 Windows 事件查看器，勾选“审核对象访问”，记录每一次文件保存，FDA 审计时可追溯原始数据修改人。

报废与环保处理

TMB 含 3,3',5,5'-四甲基联苯胺，属有害化学废液，收集于 10 L HDPE 桶，加入 5 % 亚硫酸钠还原，静置 24 h，OD 450 nm < 0.05 后按普通废液排放。微孔板高温焚烧，避免直接填埋，减少苯胺类污染。