背景与需求定位

原代胰腺成纤维细胞在体外只能维持 5–8 代，很快进入衰老期，无法支撑长周期实验。SV40 大 T 抗原介导的永生化技术突破了这一限制，使细胞获得持续增殖能力，同时保留胰腺微环境分泌表型。选购前，先回答三个核心问题：

• 实验周期是否超过 8 周？
• 是否需要可重复批次的同质细胞？
• 下游是否涉及基因编辑或 3D 共培养？

若答案皆为“是”，永生化人胰腺成纤维细胞-SV40 才是值得投入的资源。

关键质量指标拆解

1. SV40 整合位点与拷贝数

整合位点决定基因表达稳定性。优选单拷贝、AAVS1 安全位点敲入的株系，避免多拷贝随机整合造成的染色体不稳定。qPCR 检测报告应给出 T 抗原拷贝数 ≤2，Southern blot 条带单一。

2. 成纤维标志物表达谱

合格产品需同时满足：

• Vimentin、FSP1 阳性率 ≥ 98%
• α-SMA 阳性率 ≤ 5%，确保低活化状态
• Keratin 阴性，排除上皮污染

流式原始图谱应随货附带，不接受仅提供柱状图的形式。

3. 功能分泌验证

胰腺成纤维细胞的核心价值在于分泌因子支持类器官生长。索取以下数据：

• ELISA 检测 IL-6、HGF、FGF2 分泌量，连续 5 代变异系数 < 15%
• 与胰腺导管类器官共培养 7 d，类器官形成率 ≥ 80%，直径均一

供应商审计清单

现场审计时重点查看液氮罐批号与出库记录是否对应，避免“套牌”细胞。

包装规格与配套试剂

• 冻存管：1 × 10^6 cells / mL，每袋 1 mL，外盒铝箔真空袋
• 专属完全培养基：500 mL 基础 DMEM + 10 % FBS + 1 % ITS-X + 1 ng/mL FGF2，随细胞赠送 50 mL 试用装
• 支原体清除试剂盒：若复苏后检测阳性，供应商承诺免费补发一次细胞与清除试剂

拒绝仅提供“通用成纤维培养基”的供应商，胰腺微环境特异性因子缺失会导致细胞性状漂移。

价格区间与性价比

若实验室已有稳定培养基配方，选择最小规格即可；若计划做共培养或 PDX 模型，直接购买带验证报告的套餐，节省 2–3 周验证时间。

合同陷阱与维权要点

• 细胞到达 7 d 内出现支原体阳性，供应商需全额退款或重发，写进合同而非口头承诺
• STR 图谱与说明书不符，视为批次错误，可要求双倍赔偿
• 禁止“仅接受原包装退货”条款，复苏后细胞仍享有同等质保

保留干冰运输照片、开箱视频，作为维权证据。

到货验收 SOP

1. 拍摄外箱温度指示卡，确认未超温
2. 37 ℃水浴 90 s 快速复苏，台盼蓝计数活率 ≥ 85%
3. 复苏 24 h 后取样做支原体 qPCR，结果存档
4. 第 3 代时流式复核成纤维标志物，与 COA 对照

以上步骤全部合格，才签署验收单。

长期储存建议

• 液氮气相区存储，避免液相交叉污染
• 每 6 个月抽样复苏，检测倍增时间；若 PD 时间延长 > 20%，立即启用新批次
• 建立实验室内部编号体系，记录每一次冻存与复苏日期，防止批次混淆