SV40 大 T 抗原：拆掉细胞周期的两把锁

SV40 大 T 抗原进入细胞核后，先后与 Rb、P53 蛋白结合。Rb 被磷酸化失活，E2F 转录因子得以释放，G1-S 关卡失效；P53 被泛素化降解，细胞凋亡程序被静音。双重刹车解除后，上颌窦粘膜间充质干细胞得以突破复制极限，体外持续扩增 60 代以上而不出现 β-半乳糖苷酶阳性衰老信号。

hTERT 与端粒稳态：延长“分子时钟”

原代细胞端粒每分裂缩短 50–100 bp，上颌窦来源细胞尤为敏感。hTERT 催化端粒 TTAGGG 重复序列的加尾，端粒长度稳定在 9–11 kb，防止染色体末端融合。端粒 FISH 显示 95 % 细胞呈现均匀信号，无端粒功能障碍诱导的 53BP1 焦点，核型保持 46,XY 或 46,XX。

组织特异性表型保留

永生后，细胞仍维持 CD73?/CD90?/CD105? 三阳性，CD45?/CD34? 双阴性，流式检测阳性率均 >98 %。成骨、成脂、成软骨三系诱导 21 天，茜素红、油红 O、甲苯胺蓝染色阳性面积 ≥80 %，基因层面 RUNX2、PPARγ、SOX9 表达量与原代差异 <1.2 倍，证明多向分化潜能未因永生丢失。

旁分泌功能放大

永生株在常氧条件下 VEGF 分泌量 2.8 ng/mL，较原代提高 3 倍；HGF、FGF-2 同时上调。Transwell 共培养实验显示，其条件培养基使脐静脉内皮细胞成管长度增加 4.5 倍，提示促血管生成能力增强。该特性被用于构建缺血再灌注损伤修复模型。

基因组安全港插入

SV40 与 hTERT 采用 PiggyBac 转座系统，定点整合于 AAVS1 位点，远离 MYC、TERT 启动子敏感区。插入后全基因组测序显示无大片段缺失或重复，拷贝数为单拷贝，降低插入突变风险。Southern blot 一条带即可验证，避免多拷贝沉默导致功能漂移。

免疫逃逸与临床前评估

细胞表面 HLA-I 表达下调 50 %，对 NK 细胞杀伤的敏感性降低。小鼠皮下移植 1×10? 细胞，28 天无肿瘤形成，组织切片未见核异型或浸润生长。体内安全性通过第三方 GLP 机构认证，报告编号公开可查，支持后续大动物实验。