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SV40永生化人类乳腺叶状肿瘤:技术参数全景图

2025-08-29

细胞身份与来源

STR 20位点图谱与ATCC HTB-19胚乳瘤库同源度>97%,SV40大T抗原插入位点锁定于12q15区域,qPCR检测拷贝数2.1±0.2 copies/cell,批次间CV<5%。

倍增动力学

DMEM/F12+10% FBS条件下,群体倍增时间32±2 h;血清降至5%后延长至55 h,仍无显著凋亡峰,适合低血清药敏实验。

端粒长度与稳定性

P15代端粒长度保持11.8±0.3 kb,P30代仅衰减至10.7 kb,端粒酶活性比原代提升18倍,TRAP法检测ΔCt<3。

表面标志基准

流式八色组合:

  • CD34-FITC 阳性率<2%
  • CD90-PE 阳性率>95%
  • SMA-APC 阳性率<5%
  • Ki-67-BV421 增殖指数>35%

任意指标偏差>10%视为批次漂移。

三维球形成效率

超低吸附96孔板,每孔1×103细胞,72 h球体直径100–150 μm,形成率>80%,可用于药物渗透研究。

无菌与病毒安全

细菌16S rRNA、真菌ITS、支原体16S rRNA qPCR Ct≥38;HBV、HCV、HIV-1、HPV16/18实时荧光PCR Ct≥40。

冻存与复苏存活率

冻存液:90% FBS+10% DMSO,程序降温-1 ℃/min,液氮储存。复苏存活率≥85%,24 h贴壁率≥90%。

运输温控

干冰≥2 kg,72 h箱内-78±2 ℃,实时温度记录仪采样间隔≤2 min,超温>10 min触发退货。