永生化人毛囊内根鞘细胞系技术参数速查表
2025-08-26
拿到细胞后 30 分钟内就能在实验记录里写下“该株系符合 ISO 20399:2022 与 ISSCR 2021 标准”,靠的就是一份可溯源、可复现、可直接引用的技术参数清单。以下 8 个维度、36 条核心数据全部来自第三方检测报告或自建实验室实测,随货文件与电子档案一一对应,扫码即可下载原始文件。
1. 来源与伦理
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供体:24 岁男性枕部毛囊,FUE 手术残余组织
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知情同意:医院 IRB 批件编号 2023-HF-034,可在 NIH RePORTER 核验
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运输合规:持有《中国人类遗传资源出入境许可证》2024-HG-00125
2. 永生化元件
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病毒载体:pLVX-EF1α-hTERT-2A-SV40T-Puro
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整合位点:chr5:131,458,722;chr11:65,019,431(LAM-PCR + NGS)
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拷贝数:2.1 ± 0.2 copies/diploid(数字 PCR)
3. 身份与纯度
标志物
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阳性率
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抗体克隆
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检测方法
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KRT71
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98 %
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Abcam ab181690
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流式
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CD200
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96 %
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BioLegend 329402
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流式
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α-SMA
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< 2 %
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Sigma A2547
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IF 排除成纤维污染
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STR 16 位点与 Genecopoeia 原始谱 100 % 匹配,报告编号 STR-HFIR-240315。
4. 生长动力学
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倍增时间:26 ± 1 h(DMEM/F12 + 10 % FBS + 2 % HGS + 1 % ITS)
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饱和密度:1.4 × 10? cells/cm2
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推荐接种密度:3 × 10? cells/cm2,第 3 天 80 % 汇合
5. 功能读数
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屏障形成:TEER 峰值 420 ± 15 Ω·cm2(Day 7,0.4 μm Transwell)
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脂质合成:BODIPY 荧光强度 18,500 AU(对照原代 19,200 AU,差异 < 10 %)
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炎症响应:LPS 100 ng/mL 刺激 6 h,IL-6 分泌 1,150 ± 80 pg/mL
6. 遗传稳定性
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核型:46,XY,连续培养至 45 代未见非整倍体(G-banding,20 个中期相)
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端粒长度:qPCR T/S 比值 1.9 ± 0.1(45 代 vs 5 代差异 < 5 %)
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软琼脂克隆:无锚定生长阴性(14 d 观察)
7. 无菌与污染筛查
项目
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方法
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判定
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结果
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支原体
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qPCR
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Ct ≥ 35
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阴性
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细菌
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TSB 14 d
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无浑浊
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阴性
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真菌
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SDA 14 d
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无菌丝
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阴性
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8. 冻存与运输
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冻存液:90 % FBS + 10 % DMSO
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降温程序:–1 °C / min 至 –80 °C,液氮长期
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复苏存活率:93 ± 2 %(台盼蓝,37 °C 水浴 90 s)
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运输条件:干冰 ≥ 5 kg,温度记录仪 CSV 文件随货
附录:可直接引用的方法描述
“永生化人毛囊内根鞘细胞系(HFIR-SV40T-hTERT)源自 24 岁男性枕部毛囊,经 EF1α 驱动 hTERT 与 SV40T 慢病毒整合,STR 16 位点 100 % 匹配,支原体、细菌、真菌三重阴性,第 30 代倍增时间 26 ± 1 h,TEER 峰值 420 Ω·cm2。”