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永生化人毛囊内根鞘细胞系技术参数速查表

2025-08-26

拿到细胞后 30 分钟内就能在实验记录里写下“该株系符合 ISO 20399:2022 与 ISSCR 2021 标准”,靠的就是一份可溯源、可复现、可直接引用的技术参数清单。以下 8 个维度、36 条核心数据全部来自第三方检测报告或自建实验室实测,随货文件与电子档案一一对应,扫码即可下载原始文件。


1. 来源与伦理

  • 供体:24 岁男性枕部毛囊,FUE 手术残余组织
  • 知情同意:医院 IRB 批件编号 2023-HF-034,可在 NIH RePORTER 核验
  • 运输合规:持有《中国人类遗传资源出入境许可证》2024-HG-00125

2. 永生化元件

  • 病毒载体:pLVX-EF1α-hTERT-2A-SV40T-Puro
  • 整合位点:chr5:131,458,722;chr11:65,019,431(LAM-PCR + NGS)
  • 拷贝数:2.1 ± 0.2 copies/diploid(数字 PCR)

3. 身份与纯度

标志物 阳性率 抗体克隆 检测方法
KRT71 98 % Abcam ab181690 流式
CD200 96 % BioLegend 329402 流式
α-SMA < 2 % Sigma A2547 IF 排除成纤维污染

STR 16 位点与 Genecopoeia 原始谱 100 % 匹配,报告编号 STR-HFIR-240315。


4. 生长动力学

  • 倍增时间:26 ± 1 h(DMEM/F12 + 10 % FBS + 2 % HGS + 1 % ITS)
  • 饱和密度:1.4 × 10? cells/cm2
  • 推荐接种密度:3 × 10? cells/cm2,第 3 天 80 % 汇合

5. 功能读数

  • 屏障形成:TEER 峰值 420 ± 15 Ω·cm2(Day 7,0.4 μm Transwell)
  • 脂质合成:BODIPY 荧光强度 18,500 AU(对照原代 19,200 AU,差异 < 10 %)
  • 炎症响应:LPS 100 ng/mL 刺激 6 h,IL-6 分泌 1,150 ± 80 pg/mL

6. 遗传稳定性

  • 核型:46,XY,连续培养至 45 代未见非整倍体(G-banding,20 个中期相)
  • 端粒长度:qPCR T/S 比值 1.9 ± 0.1(45 代 vs 5 代差异 < 5 %)
  • 软琼脂克隆:无锚定生长阴性(14 d 观察)

7. 无菌与污染筛查

项目 方法 判定 结果
支原体 qPCR Ct ≥ 35 阴性
细菌 TSB 14 d 无浑浊 阴性
真菌 SDA 14 d 无菌丝 阴性

8. 冻存与运输

  • 冻存液:90 % FBS + 10 % DMSO
  • 降温程序:–1 °C / min 至 –80 °C,液氮长期
  • 复苏存活率:93 ± 2 %(台盼蓝,37 °C 水浴 90 s)
  • 运输条件:干冰 ≥ 5 kg,温度记录仪 CSV 文件随货

附录:可直接引用的方法描述

“永生化人毛囊内根鞘细胞系(HFIR-SV40T-hTERT)源自 24 岁男性枕部毛囊,经 EF1α 驱动 hTERT 与 SV40T 慢病毒整合,STR 16 位点 100 % 匹配,支原体、细菌、真菌三重阴性,第 30 代倍增时间 26 ± 1 h,TEER 峰值 420 Ω·cm2。”