日常巡检：显微镜下的四个关键指标

每天开机后先扫视整瓶：

• 细胞形态保持鹅卵石单层，边缘无拉丝
• 培养液颜色无突变成橘黄或紫红
• 悬浮死细胞 < 5 %
• 菌丝或颗粒闪光立即丢弃整瓶

一个指标异常就停实验，先排障再传代，避免污染扩散。

支原体隐形污染的净化方案

qPCR Ct 30–34 的灰区最常见。处理步骤：

1. 丢弃所有开瓶试剂，用 75 % 酒精擦拭培养箱内壁
2. 使用 BMEC-Detox 培养基（含 25 μg/mL 普拉特霉素）连续培养 3 代
3. 每代取样跑 qPCR，Ct ≥ 36 视为净化完成

净化期间禁止并行其他细胞系，防止交叉回传。

倍增放缓的急救

P30 以后倍增时间从 22 h 拉长到 30 h，多半因 FBS 活性下降或 pH 漂移。

• 更换新批次 FBS 并做 NO 释放验证
• 检测培养箱 CO? 实际浓度，校准至 5.0 ± 0.1 %
• 加入 100 μM 抗坏血酸与 10 ng/mL bFGF，72 h 内倍增时间可回到 24 h

TEER 值下跌的排查链

TEER < 250 Ω·cm2 时，按顺序检查：

1. 插入式小室是否超期（>20 次使用立即淘汰）
2. Hydrocortisone 是否漏加（复苏后 24 h 必须补充）
3. 胶原包被是否干裂（干燥 30 min 以上需重新包被）

替换耗材后，TEER 可在 48 h 恢复 90 % 峰值。

冻存复苏存活率骤降

复苏贴壁率 < 80 % 通常与 DMSO 批次含水有关。

• 改用色谱级 DMSO，并在复苏后 2 h 内加入 5 μM ROCK 抑制剂
• 离心后重悬用 37 °C 预温培养基，减少渗透冲击

连续两次复苏存活率 < 85 %，立即启用 Master Bank。

年度深度保养时间表

所有数据上传到实验室 LIMS，扫码即可溯源。