1 先厘清实验需求：动脉特异性还是通用内皮

SV40 永生化的小鼠颈动脉内皮细胞最突出的优势是保留剪切应力响应元件（KLF2、eNOS）。如果实验侧重动脉粥样硬化或血流动力学模型，应直接锁定“颈动脉来源”而非泛血管内皮。写下三个必答问题：

• 是否需要 15 dyn/cm2 以上剪切平台
• 是否计划转染大质粒 (>8 kb)
• 是否需与原代平滑肌共培养

把答案写在采购需求表第一栏，后面每一参数都与之对标。

2 细胞来源与溯源链：必须可追踪到小鼠编号

合法来源的批次会附带：

• 小鼠编号、性别、周龄、品系（通常 C57BL/6J）
• 颈动脉取材照片（含解剖标尺）
• SV40 Large T 整合位点 Southern blot 原图

三者缺一直接淘汰。注意部分供应商用“主动脉”混充“颈动脉”，要求提供血管分叉处高倍显微图，内中膜厚度 < 60 μm 才是真颈动脉。

3 功能验证报告：三红线不可退让

• 乙酰化 LDL 摄取 ≥ 95 %，DiI-Ac-LDL 荧光应集中于核周环
• eNOS 磷酸化 剪切刺激 6 h 后 p-eNOS(Ser1177) 提升 ≥ 5 倍
• KLF2 mRNA 上调 15 dyn/cm2 剪切 12 h 后 ≥ 20 倍

报告需给出原始流式图和 qPCR 曲线；只提供柱状图的一律视为未验证。

4 生长曲线与代次界限

索取 P5-P35 的 CPD（累积倍增数）曲线，线性区间斜率 0.85–1.0 为佳。斜率跌破 0.6 即表明衰老启动，代次超过 P40 不宜购入。冻存密度应 ≥ 3 × 10? cells/mL，确保一次复苏就能铺满两块 6 孔板。

5 质粒转染兼容性

SV40 永生化细胞往往高表达 Large T，部分株对阳离子脂质体敏感。要求供应商提供 Lipofectamine 3000、PEI 和电穿孔三种方式的效率报告：

• 脂质体 ≥ 75 %
• 电穿孔 ≥ 85 %
• CRISPR RNP 敲入效率 ≥ 30 %

实验若需 Cas9 敲入，优先选已做 AAVS1 安全港整合测试的株系，减少随机插入风险。

6 支原体与病毒安全包

放行标准必须包含：

• qPCR 支原体 Ct ≥ 36
• 小鼠病原体 Panel（LDEV、MHV 等 11 项）全阴性
• 内毒素 < 0.1 EU/mL

报告编号应与冻存管二维码一一对应，扫码后可在第三方检测平台实时查验。

7 配套培养体系与批次锁

完全培养基：DMEM-low glucose + 20 % FBS + 1×ECGS + 1 % P/S。

要求供应商锁定 FBS 批次号，并提供 2 L 试用装。自行更换血清需重新跑剪切应力响应曲线，时间成本极高，因此一次性锁定批次最划算。

8 售后与替换条款

• 30 代内出现表型漂移（KLF2 上调 < 10 倍）可全额退款
• 运输过程存活率 < 90 % 免费补发
• 技术咨询响应 ≤ 12 h，提供实验设计模板与剪切装置校准视频

把上述条款写进采购合同，避免后期口头扯皮。