永生化人胰腺间充质干细胞 - SV40（Immortalized Human Pancreatic Mesenchymal Stem Cells - SV40）是通过将人胰腺间充质干细胞利用猴病毒 40（SV40）大 T 抗原进行转导，使其获得永生化特性的一种细胞系。以下是关于该细胞系操作使用的详细介绍：

细胞特性与优势

• 永生化特性 ：经过 SV40 大 T 抗原转导后，这些细胞能够突破正常的细胞增殖极限，实现无限增殖，为长期的实验研究提供了稳定的细胞来源。
• 保留干细胞特性 ：尽管经过了永生化处理，但它们仍然保留了许多原始间充质干细胞的特性，如多向分化潜能，可分化为脂肪、骨、软骨等多种细胞类型，以及支持胰腺组织再生和修复的能力，这使得它们在研究胰腺疾病的发生发展机制、组织工程和再生医学等方面具有重要价值。

培养条件

• 培养基 ：通常使用 PriGrow III 添加 10% 的胎牛血清（FBS）和 1% 的青霉素 / 链霉素溶液。也可根据具体实验需求选择其他适合的培养基，如含 10% FBS 和 1% 青霉素 / 链霉素的 DMEM/F12 培养基。
• 培养容器 ：推荐使用 PriCoat? T25 培养瓶或 Applied Cell 细胞外基质涂层培养瓶，以提供适宜的附着表面，促进细胞的生长和粘附。
• 培养环境 ：在 37℃、5% CO? 的培养箱中进行培养，这样的环境有助于维持培养基的 pH 值和细胞的正常代谢。

冻存与复苏

• 冻存 ：使用含 10% DMSO 的完全培养基或专门的冻存液作为冻存介质。将细胞悬浮液分装于冻存管中，每管 1×10? 个细胞左右，然后采用程序降温的方法，先在 4℃下放置 30 分钟，再放入 - 20℃下 30 分钟，最后转移至液氮中长期保存。也可使用冻存盒，将冻存管放入冻存盒中，放置 - 80℃冰箱中过夜，之后转入液氮保存。
• 复苏 ：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃水浴中快速解冻，轻轻摇动冻存管以加速解冻过程。解冻后的细胞悬液应立即转移至含有适量预温完全培养基的离心管中，轻轻吹打混匀，然后以 125xg 的速度离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种到预先准备好的培养瓶中，加入适量的培养基，置于 37℃、5% CO? 的培养箱中培养。

传代操作

• 传代时机 ：当细胞在培养容器中的生长密度达到 80% 左右时，即可进行传代操作。一般来说，每周可进行 1 至 2 次传代，但具体的传代频率还需根据细胞的生长状态和实验需求进行调整。
• 传代步骤 ：首先吸除培养瓶中的旧培养基，加入适量的 PBS 润洗细胞，以去除残留的培养基和杂质。然后加入 0.25% 的胰蛋白酶 - EDTA 溶液，在显微镜下观察细胞，待细胞大部分脱落时，加入等体积的完全培养基终止胰蛋白酶的作用。将细胞悬液转移至离心管中，以 125xg 的速度离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀，按照 1:2 至 1:4 的比例将细胞悬液分装到新的培养瓶中，并加入适量的培养基，继续进行培养。

注意事项

• 无菌操作 ：在整个操作过程中，包括培养、冻存、复苏和传代等环节，都必须严格遵守无菌操作原则，以防止微生物的污染，确保细胞的健康生长。
• 细胞状态监测 ：定期观察细胞的形态和生长状态，记录细胞的生长曲线，及时发现并处理可能出现的问题，如细胞污染、生长异常等。
• 培养基更换 ：根据细胞的生长速度和实验需求，定期更换培养基，一般每 2 至 3 天更换一次，以提供充足的营养物质，维持细胞的良好生长状态。