摘要：本研究运用 Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法），探究脓毒症急性肺损伤发生发展过程中 Caspase - 1 的活性变化及其在炎症和细胞焦亡通路中的作用机制，为脓毒症急性肺损伤的防治提供新的理论依据。通过盲肠结扎穿孔术（CLP）构建脓毒症小鼠模型，采用试剂盒检测不同时间点肺组织中 Caspase - 1 的活性，并结合免疫组化、蛋白免疫印迹（Western blot）等技术分析相关炎症及细胞焦亡指标。

关键词：Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法）；脓毒症；急性肺损伤；细胞焦亡

一、引言

脓毒症是临床常见的急危重症，常并发急性肺损伤，病死率极高。炎症反应过度激活以及细胞焦亡在脓毒症急性肺损伤的病理过程中起着关键作用。Caspase - 1 作为炎症小体的关键组成部分，不仅能激活炎症因子 IL - 1β 和 IL - 18，还可诱导细胞焦亡。Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法）操作简便、结果可靠，为深入研究 Caspase - 1 在脓毒症急性肺损伤中的机制提供了有力工具。

二、材料与方法

（一）实验动物及分组

选用 SPF 级雄性 C57BL/6 小鼠，随机分为假手术组、脓毒症组。脓毒症组小鼠通过 CLP 手术构建模型，假手术组仅进行开腹操作后关腹。

（二）主要试剂与仪器

Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法）购自 [具体公司]，兔抗小鼠 Caspase - 1、IL - 1β、IL - 18、Gasdermin D 等一抗，以及相应二抗。主要仪器包括酶标仪、离心机、蛋白电泳及转膜装置、荧光显微镜等。

（三）Caspase - 1 活性测定

分别在 CLP 术后 6、12、24 小时处死小鼠，取肺组织制备匀浆。按照试剂盒说明书，将组织匀浆与反应缓冲液、底物混合，37℃孵育 1 小时，酶标仪 405nm 波长处测定吸光度，依据标准曲线计算 Caspase - 1 活性。

（四）免疫组化检测

取肺组织石蜡切片，依次进行脱蜡、水化、抗原修复、封闭等处理，加入兔抗小鼠 Caspase - 1 一抗，4℃孵育过夜，次日加入二抗及 DAB 显色液显色，苏木精复染后封片，显微镜下观察 Caspase - 1 在肺组织中的表达及定位。

（五）Western blot 检测

提取肺组织总蛋白，BCA 法测定蛋白浓度，进行 SDS - PAGE 电泳、转膜、封闭后，分别加入兔抗小鼠 Caspase - 1、IL - 1β、IL - 18、Gasdermin D 等一抗，4℃孵育过夜，TBST 洗膜后加入相应二抗，化学发光法显影，分析蛋白表达水平。

三、结果

（一）肺组织 Caspase - 1 活性变化

与假手术组相比，脓毒症组小鼠肺组织中 Caspase - 1 活性在术后 6 小时开始显著升高（P < 0.05），12 小时达到峰值，24 小时仍维持较高水平。

（二）免疫组化结果

假手术组肺组织中 Caspase - 1 表达较少，主要位于肺泡上皮细胞及少量炎性细胞；脓毒症组肺组织中 Caspase - 1 阳性表达明显增多，且在肺泡巨噬细胞、中性粒细胞及损伤的肺泡上皮细胞中均有大量表达。

（三）Western blot 结果

脓毒症组肺组织中 Caspase - 1、IL - 1β、IL - 18、Gasdermin D 蛋白表达水平较假手术组显著升高（P < 0.05），且变化趋势与 Caspase - 1 活性变化一致。

四、讨论

本研究利用 Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法）明确了在脓毒症急性肺损伤小鼠模型中，肺组织 Caspase - 1 活性显著升高，且与炎症因子 IL - 1β、IL - 18 以及细胞焦亡关键蛋白 Gasdermin D 的表达密切相关。Caspase - 1 的激活可能通过促进炎症因子成熟释放以及诱导细胞焦亡，加重脓毒症急性肺损伤时的肺部炎症反应和组织损伤。这提示 Caspase - 1 有望成为脓毒症急性肺损伤治疗的潜在靶点，而 Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法）为该机制研究提供了重要技术支撑，有助于深入理解疾病发病机制，为临床治疗提供新思路。

五、结论

本研究通过使用 Caspase - 1 活性分析试剂盒（比色法），揭示了 Caspase - 1 在脓毒症急性肺损伤中的活性变化规律及其在炎症和细胞焦亡通路中的关键作用，为进一步研究脓毒症急性肺损伤的发病机制和治疗策略提供了重要依据。

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