一、核心生物反应：乳酸与丙酮酸的互变

LDH催化乳酸与丙酮酸之间的可逆转化，同时伴随辅酶I（NAD?/NADH）的氧化还原态变化。这是所有LDH检测方法的基石。关键反应式如下：

正向反应（丙酮酸 → 乳酸）
丙酮酸 + NADH + H? ? L?-乳酸 + NAD?
逆向反应（乳酸 → 丙酮酸）
L?-乳酸 + NAD? ? 丙酮酸 + NADH + H?

决定性差异：

多数试剂盒采用正向反应（丙酮酸还原）。NADH在340nm处有强吸收峰，其消耗量与LDH活性直接相关。监测340nm吸光度下降速率可精确计算酶活性（U/L）。此方法灵敏度高，干扰少。

二、比色法检测：NADH的定量追踪

基于NADH在340nm紫外光下的特异性吸收特性，构建检测体系：

1. 反应启动：在含NADH、丙酮酸底物的缓冲液中加入样本（血清/细胞裂解液）。
2. 酶促动力学：LDH催化丙酮酸还原为乳酸，同步消耗NADH。
3. 信号捕获：分光光度计连续监测340nm吸光度下降速率（ΔA/min）。
4. 活性计算：

LDH活性 (U/L) = (ΔA/min × 反应体系体积 × 1000) / (ε × 光径 × 样本体积)

ε为NADH摩尔消光系数（通常为6.22 L·mol?1·cm?1）

技术关键点：

• 温控精度：反应需在恒温（如37℃）进行，温度波动±0.1℃可导致结果偏差＞2%。
• 初始线性期：仅反应开始后30-60秒内的线性吸光度变化反映真实酶活性。

三、试剂盒组分的协同作用

商用试剂盒通过优化组分确保反应特异性与稳定性：

干扰排除设计：

• 样本预稀释：降低内源性丙酮酸/乳酸对反应平衡的影响。
• 抗凝剂选择：避免肝素（抑制LDH同工酶4/5），推荐血清或EDTA血浆。

四、标准化的操作精度保障

误差源控制直接影响结果可靠性：

1. 加样精度：
• 使用校准移液器（误差＜1%），血清样本加样量通常为5-10μl。
2. 混匀操作：
• 轻柔涡旋3秒，避免产生气泡（气泡散射光干扰340nm读数）。
3. 延迟时间：
• 从样本加入至光度计启动监测需＜15秒，防止预反应消耗底物。

临床警戒值示例：

成人血清LDH参考区间：125-220 U/L（37℃法）
＞500 U/L提示心肌梗死、肝损伤或溶血可能；＞1000 U/L需紧急排查恶性肿瘤。