polymyxin B 是一种环状阳离子多肽，五正电荷骨架与脂质 A 的磷酸基团形成盐桥，疏水尾链插入酰基链间隙，形成 1:1 稳定复合物。树脂骨架把这一反应从液相搬到固相，流速 300 cm h?1 时仍保持 ≥ 95 % 结合率，这是 Endotoxin Removal resin 能把 EU/mL 从 10? 降到 < 0.1 EU/mL 的化学根基。

骨架决定流速：琼脂糖、甲基丙烯酸与纤维素谁更扛压

• 4 % 交联琼脂糖（Sepharose CL-4B 类似物）孔径 70 nm，蛋白扩散系数高，但 0.3 MPa 就变形，适合重力柱。
• 高刚性甲基丙烯酸微球（如 BMR2140 系列）粒径 50 μm，耐压 1 MPa，可在 ?KTA 上跑到 500 cm h?1，适合疫苗、ADC 等粘度高的样品。
• 纤维素纳米纤维表面积 120 m2 g?1，配基密度可拉到 8 mg polymyxin B mL?1，但压缩系数大，只适合低压层析。

选骨架先看工艺压力，再看样品粘度，最后看预算；高流速工艺直接把琼脂糖筛掉，没有折中余地。

配基密度与载量陷阱：4 mg mL?1 是黄金拐点

把 polymyxin B 密度从 2 mg mL?1 提到 6 mg mL?1，静态载量线性上升；超过 6 mg mL?1 后，邻近肽链电荷排斥，有效孔径缩小，动态载量反而下降 15 %。实验数据显示，4 mg mL?1 时 10 % 穿透点对应 2.5 × 10? EU mL?1，综合回收率与寿命，是经济-性能最优拐点。

表面修饰： spacer arm 长度如何影响蛋白回收

直接偶联 polymyxin B 时，蛋白回收率常低于 80 %，原因是肽链正电荷与带负电的蛋白非特异结合。引入 6-氨基己酸作 1 nm spacer，再偶联肽，蛋白回收率可拉到 95 %，内毒素清除效率不变。 spacer 太长（> 3 nm）会增大空间位阻，脂 A 结合速率常数 kd 下降一个数量级，得不偿失。

清洗与再生：0.1 M NaOH 是寿命分水岭

polymyxin B 酰胺键在 0.1 M NaOH、25 °C 下半衰期 45 min，升高到 0.5 M NaOH 只剩 6 min。推荐 CIP 循环：0.1 M NaOH + 0.5 M NaCl，15 min，立即用 PBS 中和。树脂寿命可维持 200 次循环，载量衰减 < 10 %。若工艺必须 0.5 M NaOH，选耐碱型 BMR2140-B 系列，通过 N-甲基化改造把肽链酰胺键换成仲胺，半衰期延长到 90 min。

灭菌误区：121 °C 高压灭菌一次，载量掉 30 %

琼脂糖骨架 121 °C 20 min 会开始解交联，微球破裂；polymyxin B 肽环高温氧化，色氨酸残基消失，脂 A 结合位点丢失。正确姿势：用 0.22 μm 过滤除菌，层析柱在线 70 % 乙醇冲洗 30 min，SIP 完成。

存储条件：2 % 苯甲醇比 20 % 乙醇更能防干

树脂风干后孔道塌陷，再溶胀只能恢复 85 % 载量。2 % 苯甲醇水溶液蒸气压低，4 °C 密封储存 12 个月，载量零衰减；20 % 乙醇蒸气压高，瓶盖微漏即可导致干裂。运输时把湿润树脂打成 50 % 悬液，避免结冰，冰晶会切断微球。

故障排查：压力飙升 80 % 是蛋白沉淀，不是树脂堵

polymyxin B resin 带正电，样品 pI 7–9 的蛋白易在柱头形成可逆沉淀。把样品电导调到 15 mS cm?1，再上柱，压力立刻回落。若压力仍高，反向冲洗 2 倍柱体积 0.2 % Triton X-100，90 % 情况可恢复。

一次性 vs 重复使用：疫苗工艺宁可多花钱也不回用

mRNA 疫苗下游 EU 要求 < 0.01 EU dose?1，重复使用哪怕 1 % 残留模板 DNA 与 LPS 交叉污染，都会让 QC 失控。一次性 1 mL 预装柱成本 60 美元，单批 10 万剂疫苗摊销不到 0.1 美元，QC 失败一次损失百万美元，账很好算。

选购清单：把隐藏成本算进去

1. 动态载量（10 % 穿透）≥ 2 × 10? EU mL?1
2. 配基脱落 ≤ 2 ppm（ELISA 检测）
3. 提供 0.1 M NaOH 耐受 200 循环验证报告
4. 预装柱耐受 1 MPa，接口兼容 ?KTA
5. 有 DMF 备案号，方便申报 FDA

把以上五条写进采购合同，后期工艺验证可省 3 周时间。