通用型免疫荧光（IF）工具箱（抗兔 Dylight 594）把封闭、孵育、封片 3 步压缩到 90 min，二抗预滴定 1:500，618 nm 发射峰与 561 nm 激光锁死，带宽 11 nm，与 GFP 无串扰，单通道就能拍出高反差红光。

Dylight 594 工作原理：在铰链区装 5 个光子芯片

山羊抗兔 F(ab')? 片段经胃蛋白酶切除 Fc，分子量 110 kDa，扩散系数提升 25 %，37 ℃ 孵育 30 min 饱和。每个 F(ab')? 定向标记 5 个 Dylight 594 分子，量子产率 0.92，光稳定性 80 000 光子/分子，连续照射 10 min 衰减 <3 %，适合拍摄 3D 时间序列。

开箱即用的硬核参数

• 二抗浓度：1 mg/mL，1:500 稀释后单张 15 mm 盖玻片 40 μL，整盒 50 片，单样成本 3.8 元。
• 封闭液：5 % 正常驴血清，IgG 7.3 mg/mL，与兔抗体交叉 <0.01 %，原代神经元封闭 1 h 不激活胶质细胞。
• 抗淬灭封片剂：折射率 1.47，固化后 40 ℃ 烘箱 10 天不龟裂，匹配 1.49 NA 油镜，球差最小，分辨率 20 nm。
• 光谱稳定性：561 nm 激发 15 min，荧光强度维持 98 %，同批次 CV<2 %，多通道拼接无色移。

实测对比：工具箱 vs 自配 Alexa 594

兔抗 β-catenin 1:1000 4 ℃ 过夜：

把工具箱写进方法，一次过审

“Sections were incubated with anti-rabbit Dylight 594 (1:500, IF toolkit, lot# R240815) for 30 min at 37 °C. Images were acquired using 561 nm laser and 620/60 nm emission filter.” 一行写清货号、稀释度、滤光块，编辑不再要求补充光谱。

实验室省钱技巧：一盒多标

• 三色扩展：工具箱预留远红空位，直接加抗鼠 Dylight 650，无需重新封闭，两天做完三色。
• 抗体回收：一抗稀释液含 0.02 % NaN?，4 ℃ 回收 6 次，效价下降 <5 %，节省抗体 50 %。
• 超分辨成像：封片剂折射率匹配油镜，STORM 单分子定位精度 20 nm，无需换介质。