1. 开管即分装

原装 1 mL 液体抗体反复升温一次，活性损失 5 %。收到后立刻在生物安全柜内分装成 20 μL 微管，管壁用耐低温记号笔写货号-批次-日期，避免手写标签被乙醇抹掉。每管只够一次大膜，杜绝回冻。

2. 甘油浓度临界点

加 50 % 甘油后 –20 °C 不结冰，但甘油 <30 % 仍出现冰晶，抗体 Fc 段被剪切。用移液器先加 100 μL 抗体，再补 100 μL 100 % 甘油，颠倒 20 次，瞬时离心，确保终浓度 50 %，冰晶窗口彻底关闭。

3. 冻干备份法

实验室冰箱常年 –80 °C 空间紧张，可把剩余 200 μL 做冻干：加等量 10 % 蔗糖+0.05 % Tween-20，液氮预冻后上冻干机 24 h，得白色饼块。真空封袋，常温运输 7 天活性降 <2 %，到外地合作组再复溶，条带强度与新鲜对照差 3 % 以内。

4. 化冻节奏

37 °C 水浴 30 s 足以化冻 20 μL 微管，超过 60 s 管中心温度升到 25 °C，聚合反应开始。化完立刻插冰上，再稀释成工作液，能把聚集体控制在 1 % 以下，背景黑点消失。

5. 工作液寿命

稀释成 1:5 000 的 TBST 工作液，4 °C 存放 72 h 信号剩 85 %。加 0.02 % NaN? 可延长到 7 天，但 HRP 标记会被抑制。折中方案：第一天用剩的工作液直接做 CoIP 检测，不浪费也不影响后续显色。

6. 管口清洁

每次取液后用 70 % 乙醇擦管口外螺纹，防止盐析结晶划破密封圈。一年后打开无白色颗粒，蒸发量 <1 %，浓度维持原厂标称值。忽略这步，密封圈缝隙吸潮，抗体浓度逐年升高，导致背景加深却找不到原因。

7. 冰箱温度分布验证

–20 °C 家用冰箱门架温度波动 8 °C，底层抽屉只波动 2 °C。把抗体盒放在最下层，加一瓶 500 mL 甘油做蓄冷块，日常开门 30 s 内温度漂移 <1 °C，相当于给抗体穿件恒温背心。

8. 污染急救

微管掉进气溶胶污染，菌落 PCR 检测出现 16S 条带。用 0.22 μm 滤膜直接过滤，损失体积 10 μL，活性降 3 %，比加 NaN? 更安全。过滤后换新管，原管高压灭掉，避免交叉污染整个盒子。

9. 过期不等于报废

COA 写 36 个月，到期后先测 A280，蛋白浓度下降 <5 % 可继续用于定性 Western。条带弱 10 %，把稀释比例从 1:5 000 调到 1:3 000，信号回到原位，还能再撑半年。浓度掉 15 % 以上直接降级做斑点封闭实验，不浪费科研经费。

10. 电子记录同步

每取一次管，在 ELN 里扫码记录剩余数量，系统自动算半衰期。低于 3 管触发采购提醒，提前 30 天订货，价格锁定，避免临时下单遇到批次断档。三年下来，实验室因为断货重复验证的费用降到零。