1. 分子骨架与剪切版本

• 全长 CD163：1150 aa，胞外区 9 个 SRCR 结构域
• sCD163：主要片段 SRCR1-3，分子量 130 kDa；金属蛋白酶 ADAM10 在 Ala741-Val742 剪切，释放效率 12 %/h
• 糖基化占比：N-糖 14 位，O-糖 35 位，总质量 22 %；去糖基化后 SDS-PAGE 降 25 kDa，活性不变，检测表位可能丢失

2. 校准品溯源链

• WHO 参考品：NIBSC 19/118，浓度 100 ng/mL，采用 SEC-HPLC 定值，扩展不确定度 8 %
• 企业工作校准：与 WHO 平行比对，偏差 ≤±5 %，溯源报告随试剂盒附带，审稿人常查

3. 检测平台对比参数

4. 关键表位定位

• 捕获抗体 6C3：SRCR2 的 Glu325-Pro335，识别还原与非还原态，不受糖基化影响
• 检测抗体 8B6：SRCR3 的 Cys412-Cys427，依赖二硫键构象；样品煮 5 min 信号降 90 %，ELISA 严禁加热处理

5. 稳定性硬核数据

• 血清：25 ℃ 放置 24 h，浓度 +8 %；4 ℃ 7 天，-4 %；-80 ℃ 24 个月，-6 %
• EDTA 血浆：sCD163 与钙离子无关，结果与血清差异 <3 %；肝素血浆平均低 10 %，因 ADAM10 活性被抑制，剪切减少
• 冻融：3 次循环下降 5 %；6 次循环下降 15 %，建议分装 ≤200 μL/管

6. 干扰与钩状效应

• 类风湿因子：120 IU/mL 导致 CLIA 假阳性 +0.8 ng/mL，可用 HBR 阻断剂 0.5 mg/mL 中和
• 高剂量钩状：ELISA 在 500 ng/mL 出现前带，信号倒跌 30 %；两步法或 1:1000 预稀释可规避

7. 参考区间与临床灰区

• 健康成人：血清 0.7–2.3 ng/mL（CLIA，n=435，95 % 百分位）
• 慢性肝病：Fibrosis F2-F4 均值 4.8 ng/mL，取 3.0 ng/mL 为灰区，阳性预测值 78 %
• 脓毒症：入院 >12 ng/mL 与 28 天死亡率相关，HR 2.1，Cut-off 经 ROC 优化为 11.7 ng/mL

8. 校准曲线拟合方式

• 四参数 Logistic：R2 ≥0.998；边缘两点剔除后 R2 仍 ≥0.995，否则整批作废
• 低浓度锚点：0 ng/mL 孔 OD 应 ≤0.080（450 nm），高于 0.1 判定为板间污染，需重洗板或换新板条

9. 质控品允许范围

• 高值 QC：靶值 20 ng/mL，±2 SD 17.2–22.8 ng/mL；Westgard 1-2s/1-3s 规则，触发失控需整批重做
• 低值 QC：靶值 1.5 ng/mL，±2 SD 1.2–1.8 ng/mL；连续 10 批在 1 SD 同一侧，提示系统偏移，需重新校准

10. 申报注册常用性能指标

• 检出限：LOD=Blank mean+3SD，申报资料需 ≥60 次独立空白
• 线性：R ≥0.99，绝对偏差 ≤±8 %；覆盖宣称区间 0.15–60 ng/mL
• 可比性：与上市同类试剂回归斜率 0.95–1.05，截距 ≤0.2 ng/mL，R ≥0.975