先认亚型，再定灵敏度

人源 MMP-13 全长 471 aa，活化后切除前肽，活性中心 20 kDa。ELISA 测总蛋白，活性法只认活化型。用活性检测时，把“前肽去除率”写进技术参数，要求厂家提供 APMA 激活验证图，活性≥90 %，否则背景值直接抬高 30 %。

检测原理：FRET 底物一秒看酶活

标准底物 Dnp-PLG↓RAG-NH?，激发 340 nm，发射 405 nm。MMP-13 切断后荧光强度翻倍，反应体积 100 μL，37 ℃ 10 min 读一次。底物 Km 7 μM，技术参数里把“线性区间”标成 0.5–10 nM，超出后荧光漂移，每 5 min 掉 8 %。

灵敏度：LOD 0.05 ng/mL 是门槛

优质试剂盒 LOD≤0.05 ng/mL，定量下限 0.15 ng/mL，血清稀释 20 倍仍能测到 3 pg 活化酶。技术参数表没写 LOD 只写“＜0.1 ng”的，多半是 0.08 ng，换算下来 50 μL 样本需要稀释 5 倍，浪费 200 μL 血清。

精密度：批内 CV≤5 %，批间 CV≤8 %

厂家只给批间 CV 10 %，实验组 20 块板做下来，高低值质控点会飘出 15 %。把批内 CV≤5 %、批间 CV≤8 % 写进合同，到货抽 3 块板实测，不合格整批退货，省下一周重复实验。

特异性：MMP-1/-2/-8/-9 交叉＜1 %

技术参数里必须附交叉表。优质试剂盒对 MMP-1、-2、-8、-9 交叉＜1 %，对 MMP-3 ＜3 %。交叉 5 % 的批次测关节炎滑液，MMP-3 高值样本会把 MMP-13 结果虚高 0.8 ng/mL，直接误判阳性。

标准品溯源：WHO NIBSC 代码 12/272

国际标准品 12/272 每支 10 μg，复溶后 1000 ng/mL。把“可溯源至 12/272”写进技术参数，厂家随货提供校准曲线换算表，申报 IND 时审计一次通过。没有溯源的曲线，审评要求补 30 份验证，耗时 2 个月。

稳定性：冻干标准品 37 ℃ 7 天偏差≤5 %

技术参数里把加速稳定性写进去：冻干标准品 37 ℃ 放 7 天，偏差≤5 %。运输途中偶发 25 ℃ 3 天，合格批次不受影响，偏差 8 % 的到货就退货，避免曲线漂移。

酶标仪兼容性：405 nm 带宽≤10 nm

底物发射峰 405 nm，带宽≤10 nm 能把信号噪声比拉到 800:1。老旧机器带宽 12 nm，背景 OD 高出 0.02，低值样本直接掉到空白区。买试剂盒前先确认机器带宽，把参数写进采购备注，避免到货再调波长。

数据输出：原始荧光值自动备份

试剂盒软件默认导出浓度，把“原始荧光值 CSV”选项打开，每块板生成 405 nm 原始读数。审计时可直接追溯，FDA 审查员现场核对，省去补录 2000 份浓度换算表。