1. 检测范围与定量限

• 线性区间：15.6 – 1000 pg/mL，覆盖健康人血清 250 pg/mL 到脓毒症峰值 800 pg/mL
• LOD 计算：空白均值 + 2.5×SD，实测 6.8 pg/mL，比主流竞品低 30 %
• 功能灵敏度：CV ≤ 10 % 的最低浓度为 12 pg/mL，可作为疾病分层阈值

2. 校准曲线构建方式

• 标准品来源：重组人 ANG-2，E.coli 表达，经过 Heparin 亲和层析，纯度 ≥ 97 %
• 七点定标：双孔复测，4-Parameter Logistic 拟合，r ≥ 0.998，回算浓度偏差 <5 %
• 校准频率：每块板独立做曲线，禁止套用上批参数，避免灯源老化带来的系统漂移

3. 精密度与重复性

数据通过 NCCLS EP5-A2 方案验证，可直接写进注册申报资料

4. 交叉反应矩阵

• ANG-1：5000 pg/mL 时读数 < 15 pg/mL，干扰率 0.3 %
• VEGF-A：2000 pg/mL 无信号抬升
• Tie-2 受体：可溶型 10 μg/mL 不会阻断抗体对 ANG-2 识别

5. 样本体积与处理

• 血清：50 μL 上样，1:5 预稀释，稀释液含动物血清封闭异嗜抗体
• EDTA 血浆：与血清斜率差异 3 %，可直接共用标准曲线
• 细胞上清：高分泌细胞系 HMVEC 经 24 h 刺激后浓度 3 – 12 ng/mL，需再稀释 10 倍进入线性区

6. 稳定性验证

• 加速老化：37 °C 7 天，标准品回收率 93 %，底物 S/N 下降 <8 %
• 冻融循环：?80 °C ? 室温 5 次，CV 7.2 %，仍在线性允许误差带
• 开封后效期：2–8 °C 密封 30 天，信号值每天衰减 0.3 %，可接受

7. 仪器兼容性

• 酶标仪波长：450 nm 主读，630 nm 参比，带宽 10 nm，OD 线性 0–3.0
• 自动化平台：Tecan Fluent 脚本已内置，加样体积 100 μL，CV ≤ 2 %
• 微流控：适配 384 孔版，总反应体积 50 μL，灵敏度保持相同

8. 常见问题速查

9. 参数页引用格式

ANG-2 ELISA (Cat#XX-ANG-200) 技术手册 V3.2，2025-03 更新，符合 CE-IVDR 附录 I 要求