比活性基准：WHO 标准与商用货的换算坑

WHO 第 3 代 BDNF 国际标准（NIBSC 17/232）用 TF-1 细胞增殖法标定：1 000 IU ≈ 5.2 ng。厂商常标注“≥2×10? IU/mg”，却用 TrkB-转染 BaF3 测活，同一批 17/232 给出 3.1×10? IU/mg 与 5.8×10? IU/mg 两种结果，差 87 %。采购前让供应商提供靶细胞与 EC50 曲线，把 IU 与 ng 对应关系写进 COA，跨实验室才能对齐。

纯度判读：还原 SDS-PAGE 不够，需加 SEC-MALS

BDNF 同源二聚体理论 27.2 kDa，还原电泳 13.6 kDa 单条带常被当作“≥98 %”依据。SEC-MALS 显示主峰分子量 54 kDa 才算真实二聚体；出现 27 kDa 肩峰说明二硫键错配，活性下降 40 %。技术参数里写“SEC-MALS MW = 54 ±2 kDa，单体峰面积 <2 %”，可把错配体挡在门外。

内毒素与宿主蛋白：双指标卡死神经实验

BDNF 激活 TrkB 后 30 min 触发 Ca2? 内流，LPS 0.05 EU/mg 就能把海马神经元背景放电频率抬高 2 倍。CHO 表达系统 HCP 残留 >80 ppm 时，小胶质细胞 CD68 上调，干扰存活实验。参数表同时写“LPS <0.01 EU/mg，CHO HCP <50 ppm”，并附原始 LAL 与 ELISA 曲线，才算达标。

冻干保护剂：海藻糖 4 % 保留二聚体

4 % 海藻糖冻干，37 °C 加速 4 周，二聚体比例保持 92 %；甘露醇组掉到 76 %。海藻糖玻璃态 Tg 高 15 °C，能锁住 BDNF 的 Cys58-Cys108 二硫键。选购时选“trehalose 4 %, no BSA”，避免 BSA 在神经元培养中诱发非特异黏附。

分子量校正：Met-BDNF 比活性低 25 %

E.coli 表达常带 N 端甲硫氨酸，MALDI 测得 13 860 Da，比天然肽大 131 Da。体外活性实验 Met-BDNF EC50 0.8 ng/mL，天然肽 0.6 ng/mL，差 25 %。质谱报告里要求“observed mass = 13 729 ±2 Da”，可把 Met 形式排除。

储存浓度：0.25 mg/mL 是聚集拐点

动态光散射显示 0.25 mg/mL 以上 BDNF 在 4 °C 48 h 出现 100 nm 寡聚峰，EC50 漂移 1.6 倍。工作液先用 5 mM 柠檬酸 pH 4.5 稀释到 0.1 mg/mL，再用 PBS-0.05 % Tween 80 稀释至实验浓度，Tween 抑制疏水界面吸附，24 h 内活性 CV <4 %。

生物读数线性区：DIV7 海马神经元 50–800 pg/mL

Neurite outgrowth 实验里，50 pg/mL 突起长度 120 μm，800 pg/mL 达到平台 280 μm，R2 = 0.99。试剂盒写“线性 10–1 000 pg/mL”是把曲线强拉直线，10 pg/mL 信噪比 1.3，定量误差 30 %。实验设计把剂量落在 50–800 pg/mL，可落在真实线性窗。

批间 CV：TrkB 磷酸化法 <10 %

用 AlphaLISA pTrkB Y706 比 ELISA 更敏感，三批次 BDNF 在 200 pg/mL 刺激 15 min，pTrkB 信号批间 CV 8 % 直接合格。把“pTrkB CV ≤10 %”写进技术协议，厂家会把复性缓冲液导电率卡在 3.0 ±0.1 mS/cm，省得自己反复验证。

文件链：IND 申报三张图

1. 还原与非还原 SDS-PAGE 原图
2. SEC-MALS 分子量分布图
3. 体外活性与 WHO 17/232 的桥接曲线

电子版本盖章，随货同行，FDA 审评一次通过。