1. 基因坐标与转录本

• 染色体定位：1q23.2，长度 2.1 kb，含 2 个外显子
• 参考序列：NM_000567.3，1 173 bp，编码 224 氨基酸前体
• 信号肽：1–19 aa，剪切后成熟蛋白 205 aa，分子量 23.0 kDa

2. 蛋白结构快照

• 五聚体圆盘：5 个原聚体非共价组装，直径 10.2 nm，高度 4.5 nm；电镜负染呈典型“甜甜圈”
• 晶体结构：PDB 1B09，分辨率 2.0 ?，每个原聚体 6 股 β-折叠 + 2 α-螺旋
• 钙离子位点：2 Ca2?/原聚体，稳定配体结合口袋；EDTA 2 mM 使胆碱结合下降 90 %

3. 配体结合参数

• 磷酸胆碱：Kd 18 μM，钙依赖；PC 缺失突变 W67A 亲和力下降 50 倍
• 低密度脂蛋白：Ka 1.2×10? M?1，pH 7.4 下最大结合 0.8 mol LDL/mol CRP
• 补体 C1q：Kion 2×10? M?1，激活经典途径，CH50 实验 ED50 2.5 μg/mL

4. 糖基化与翻译后修饰

• 天然糖型：无；大肠杆菌重组产品与血清蛋白功能一致，糖基化不影响五聚体组装
• 半胱氨酸：无游离巯基，还原剂不能拆开五聚体；热变性 90 °C 10 min 仍保持圆盘形态
• 脱酰胺：Asn146 长期储存可生成 3 % 异天冬氨酸，不影响免疫比浊信号

5. 表达与受体结合

• 主要来源：肝脏 IL-6 刺激 24 h 上调 1 000 倍；单核细胞局部合成占循环总量 <1 %
• FcγRⅠa：Kd 4.2 μM，介导巨噬细胞吞噬；FcγRⅡb 亲和力 10 倍低，起抑制信号
• 补体调控：结合 C4bp，加速 C4b 降解 3 倍；突变 E147A 丧失调控功能

6. 检测技术参数

• 免疫比浊：线性 0.5–200 mg/L，CV 2 %；样本稀释 1:20 可扩至 400 mg/L
• 高敏 ELISA：R&D DY1707，LOD 0.15 ng/mL，CV 4 %；脑脊液微量样本 50 μL 即可
• 单分子 Simoa：LOD 3 pg/mL，CV 5 %，健康人基线 0.8 mg/L 可测微小波动

7. 稳定性与保存

• 液体：4 °C 4 周下降 <3 %；添加 0.05 % NaN? 抑制细菌，避免反复冻融
• 冻干：5 % 海藻糖 + 0.01 % Tween-20，?20 °C 五年活性保持 >95 %
• 钙保护：10 mM CaCl? 存在下 56 °C 30 min 聚合率 <2 %；缺钙聚合率升至 15 %

8. 重组工艺对比

• E. coli：无糖基，产量 8 g/L，成本 ￥1 k/g；内毒素 <0.1 EU/mg，适合校准品
• 酵母 Pichia：少量 O-糖，产量 5 g/L，内毒素 <0.01 EU/mg，诊断试剂首选
• CHO：真型折叠，产量 1 g/L，成本 ￥15 k/g，用于表面等离子共振校准

9. 质控放行硬指标

• 五聚体比例：HPLC-SEC 主峰 ≥98 %；聚集体 >2 % 导致比浊信号偏离
• 胆碱结合：PC-BSA 包被 ELISA，ED50 0.8 μg/mL，批次偏差 <10 %
• C1q 激活：CH50 实验，ED50 2.5 μg/mL；偏差 >15 % 触发回顾性验证

10. 国际校准与互换

• WHO 标准：NIBSC 85/506，1 IU = 0.41 μg；校准品溯源偏差 <2 %
• IFCC 参考：ERM-DA474/IFCC，人血清 CRP 42 mg/L，不确定度 ±1.2 mg/L，用于厂家赋值传递