1. 检出限 4 pg/ml：EP-17 报告才是硬通货

厂家标“4 pg/ml”常用“零孔均值+3SD”算法，LOQ 实际可能 12 pg/ml。

EP-17 方案要求 60 空白、3 批次、2 台仪器，LOB 1.5 pg/ml、LOD 4 pg/ml、LOQ 10 pg/ml。

索要原始 EP-17 PDF，缺一页就换品牌，审稿人现在直接查附件。

2. 标曲 10–2500 pg/ml：高端 20 % 富余给脑脊液

血清 β-NGF 中位数 80 pg/ml，脑脊液峰值 1800 pg/ml。

上限 2500 pg/ml 并给出 1:5 稀释回收率，可避免二次稀释。

验证报告必须含 2000 pg/ml 加标回收 92–108 %，缺数据就默认高端不准。

3. 前体/成熟体识别：抗体只抓 β 链 120–241 AA

β-NGF 前体 pro-NGF 分子量 27 kDa，成熟 β 链 13 kDa。

捕获抗体若落在 pro 区，会把无活性前体算进结果。

说明书应写“识别成熟 β 链 120–241 AA”，交叉 < 0.05 %。

无表位图就默认测 total-NGF，科研关联功能时数据会反着走。

4. 与 related-proNGF 交叉：必须 < 0.5 %

pro-NGF 在阿尔茨海默血清中升高 10 倍，交叉 1 % 就能把 100 pg/ml 报成 110 pg/ml。

参数表写“与 pro-NGF 交叉 < 0.5 %”并附 Western blot 图，缺图就换盒。

5. 样本稳定性：室温 4 h 掉 8 %，参数表要写清楚

β-NGF 室温下被丝氨酸蛋白酶剪切，4 h 活性掉 8 %，总蛋白不变。

参数表写“血清 4 °C 24 h 稳定”需注明“总蛋白”，做功能实验必须 ?80 °C 保存，一次冻融用完。

6. 冻融循环：5 次 CV < 10 % 才合格

β-NGF 含 3 对二硫键，反复冻融 3 次聚集体增加 10 %。

高端盒把“5 次冻融 CV < 10 %”写进参数并给批号附件，缺冻融数据就退货。

7. 批间差：10 批报告 vs 3 批口号

行业默认 3 批算批间差，CV 标 < 8 %。

稳健厂家用 10 批、3 台酶标仪，CV 仍 < 8 %。

索要 10 批原始 OD，缺一批都可能在换批号时翻车。

8. NIBSC 溯源：代码 14/140 必须出现

β-NGF 国际标品 NIBSC 14/140，10 000 IU/支。

COA 写 1 IU = 2.5 pg 并附比对图，浓度可追溯到 WHO。

无 14/140 对标，绝对浓度等于黑箱。

9. 板内热力图：边缘孔 OD 差一眼看穿

同一块板 A1 与 H12 因蒸发差异可达 6 %。

参数写“板内差 CV < 6 %”需附 96 孔热力图，颜色梯度均匀才可信。

缺图就默认 6 % 是平均值，边缘孔可能 9 % 起步。

10. 溶血干扰：Hb 2 g/L 背景 +0.10

血红蛋白 450 nm 吸光强，溶血 2 g/L 时背景 +0.10，把 50 pg/ml 报成 65 pg/ml。

参数表写“双波长 450–630 nm 扣除”可把背景压到 0.02，缺此算法的高溶血样本直接判假阳性。