细胞特性与应用

永生化小鼠远端小管 KDT3 细胞是研究肾脏功能和药物代谢的有力工具，具备无限增殖能力，可用于肾脏疾病机制探索、毒性评估及药物筛选。

培养基配制

推荐使用 DMEM 或 RPMI-1640 培养基，添加 10% 胎牛血清、1% 青霉素 - 链霉素溶液，根据需求可补充 1% 地塞米松，调节 pH 至 7.2 - 7.4。

细胞复苏

从液氮中取出冻存管，37℃水浴快速解冻，转移至含 9 ml 预热培养基的离心管，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清，重悬细胞后接种至培养容器，置于 37℃、5% CO? 培养箱静置培养。

传代操作

细胞生长至 80% - 90% 汇合时传代。用 PBS 洗涤，0.25% 胰蛋白酶 - 0.02% EDTA 消化 1 - 2 分钟，显微镜下观察细胞脱落情况，加入含血清培养基终止消化，吹打制成细胞悬液，按 1:2 - 1:3 比例分装至新容器，加入新鲜培养基继续培养。

细胞冻存

取生长良好的细胞，胰蛋白酶消化制成悬液，与含 10% DMSO 的胎牛血清按 5×10? - 1×10? cells/ml 混合，分装至冻存管，程序降温盒 -80℃过夜后转移至液氮罐保存。

常见问题解决

细胞污染

污染来源多样，预防措施包括使用无菌试剂、超净工作台操作、定期换液观察。污染发生时需立即停止培养，更换新细胞。

生长缓慢

可能因培养基营养不足或环境不稳定导致。检查培养基成分新鲜度与配比，确保培养箱温湿度、CO? 浓度稳定。

形态异常

或与消化过度、培养环境变化相关。优化消化时间，避免损伤；稳定培养条件，减少环境波动。