培养条件

• 培养基成分 ：通常采用 DMEM 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、2mM L - 谷氨酰胺、10mM HEPES 以及 1% 青霉素 - 链霉素溶液。
• 培养容器 ：推荐使用经过特殊处理的培养容器，如 Corning® 胶原包被培养皿或 Poly - L - Lysine 包被的培养瓶，这些容器能为细胞提供良好的附着表面，有利于细胞的贴壁和生长。
• 培养环境 ：将细胞置于 37℃、5% CO? 的培养箱中培养，湿度保持在 70%-80%。

冻存与复苏

• 冻存操作 ：冻存液可使用 Cryopreservation Medium 或含 10% DMSO 的完全培养基。将细胞悬浮液分装于冻存管，每管 1×10? 个细胞左右。冻存时，先置于 4℃ 30 分钟，再转移至 - 20℃ 30 分钟，最后放入液氮中长期保存。也可使用冻存盒，将冻存管放入冻存盒中，放置 - 80℃冰箱过夜，之后转入液氮保存。
• 复苏流程 ：从液氮中取出冻存管，迅速放入 37℃水浴中快速解冻，同时轻轻摇动冻存管以加速解冻过程。解冻后的细胞悬液应立即转移至含有适量预温完全培养基的离心管中，轻轻吹打混匀后，以 125xg 的速度离心 5 分钟。弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种到预先准备好的培养瓶中，加入适量的培养基，置于 37℃、5% CO? 的培养箱中培养。

传代操作

• 传代时机 ：当细胞密度超 80% 时，即可进行传代培养。
• 传代步骤 ：首先吸除培养瓶中的旧培养基，加入适量的 PBS 润洗细胞，以去除残留的培养基和杂质。然后加入 0.25% 的胰蛋白酶 - EDTA 溶液，在显微镜下观察细胞，待细胞大部分脱落时，加入等体积的完全培养基终止胰蛋白酶的作用。将细胞悬液转移至离心管中，以 125xg 的速度离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀，按照一定比例将细胞悬液分装到新的培养瓶中，并加入适量的培养基，继续进行培养。

注意事项

• 无菌操作 ：在整个操作过程中，包括培养、冻存、复苏和传代等环节，都必须严格遵守无菌操作原则，以防止微生物的污染，确保细胞的健康生长。
• 细胞状态监测 ：定期观察细胞的形态和生长状态，记录细胞的生长曲线，及时发现并处理可能出现的问题，如细胞污染、生长异常等。
• 培养基更换 ：根据细胞的生长速度和实验需求，一般每 2 至 3 天更换一次培养基，以提供充足的营养物质，维持细胞的良好生长状态。

市场分析

• 应用领域 ：永生化大鼠蛛网膜细胞 - SV40/hTERT 由于其永生化特性，在体外研究细胞增殖、分化、凋亡、衰老等生理过程方面具有重要价值，广泛应用于神经科学研究、细胞生物学研究以及药物研发等领域。
• 市场概况 ：随着生命科学领域的不断发展，细胞培养技术在生物医学研究中的应用越来越广泛，永生化大鼠蛛网膜细胞 - SV40/hTERT 作为一种优质的细胞模型，市场需求逐渐增加。目前，该细胞系主要应用于科研领域，尚未大规模应用于临床治疗。
• 价格趋势 ：由于永生化大鼠蛛网膜细胞 - SV40/hTERT 的制备工艺相对复杂，需要进行严格的无菌操作和质量检测，因此其价格相对较高。随着技术的不断进步和生产工艺的优化，未来该细胞系的价格有望逐渐下降，以满足更多科研机构和企业的使用需求。