细胞系概述与应用价值

Immortalized Mouse Calvarial Mesenchymal Progenitor Cells（iCALs）是一种经过 SV40 大 T 抗原转化的永生化小鼠颅骨间充质祖细胞系。该细胞系在骨组织工程、再生医学、骨发育机制研究以及药物筛选等领域具有重要的应用价值。iCALs 细胞保留了间充质祖细胞的特性，具有多向分化潜能，能够分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种细胞类型。

选择优质细胞系的关键要点

细胞系来源与鉴定

选择具有可靠来源的 iCALs 细胞系是实验成功的基础。优先选择来自知名细胞库或有良好声誉的商业供应商的细胞系。这些供应商通常会对细胞系进行严格的鉴定和质量控制，确保细胞系的纯度和特性。通过流式细胞术检测细胞表面标志物（如 CD90、CD105 等）和细胞核型分析，可以确认细胞系的身份和稳定性。

细胞活性与增殖能力

优质的 iCALs 细胞系应具有良好的细胞活性和稳定的增殖能力。在采购时，供应商应提供细胞生长曲线和活力检测报告，细胞 viability（存活率）应达到 90% 以上。在传代 10 - 20 代内，细胞应保持较高的增殖速率，倍增时间一般为 24 - 48 小时。细胞形态应规则，呈纺锤形或不规则多边形，无明显漂浮或形态异常现象。

多向分化潜能

iCALs 细胞的多向分化潜能是其重要的特性之一。在适当的诱导条件下，细胞应能够向成骨、软骨和脂肪等不同系细胞分化。成骨诱导实验中，细胞可形成矿化结节，茜素红染色呈红色；软骨诱导实验中，细胞形成软骨样组织，阿尔新蓝染色呈蓝色；脂肪诱导实验中，细胞内出现脂滴，油红 O 染色呈红色。供应商应提供细胞分化能力的检测报告，确保细胞系的多向分化潜能符合实验要求。

可靠供应商的选择标准

供应商资质与信誉

选择具有良好资质和信誉的供应商是确保细胞质量的关键。优先考虑通过 ISO 认证、具有良好口碑和长期供应经验的供应商。这些供应商通常对细胞系的保存、运输和质量控制有严格的标准，能够提供准确的细胞系信息和完善的售后服务。

细胞质量认证与文档

在采购 iCALs 细胞系时，要求供应商提供详细的细胞质量认证文档，包括细胞鉴定报告、支原体检测报告、细菌和真菌检测报告等。这些文档能够证明细胞系的纯度和健康状况，避免因细胞污染导致实验失败。

运输与保存条件

了解供应商的运输和保存条件是保障细胞活性的重要环节。优质的供应商通常采用干冰或液氮罐运输细胞，确保细胞在运输过程中处于低温休眠状态。收到细胞后，应按照供应商的建议尽快进行复苏和培养，并遵循相应的细胞培养操作规程。

细胞系接收与初步评估要点

细胞状态的观察与记录

收到 iCALs 细胞系后，应立即对细胞状态进行观察和记录。正常的细胞应贴壁生长，细胞形态规则，无黑点或杂质。若发现细胞大量漂浮、形态异常或出现污染迹象，应及时与供应商联系，并按照细胞污染处理流程进行处理。

细胞活力检测与验证

采用细胞活力检测方法，如 CCK - 8 法或 MTT 法，对复苏后的细胞进行活力评估。将细胞接种于 96 孔板中，加入相应试剂孵育后，通过测定吸光度值判断细胞活力。与供应商提供的参考活力值对比，评估细胞在运输和复苏过程中的活力损失情况。若细胞活力低于标准，可能影响后续实验，需考虑重新采购或要求供应商提供解决方案。

细胞表型与功能验证

在细胞复苏并传代 2 - 3 代后，进行细胞表型和功能验证实验。通过免疫荧光染色或 Western blotting 方法检测细胞表面标志物和干细胞相关蛋白的表达。同时，进行多向分化诱导实验，验证细胞的成骨、软骨和脂肪分化能力。若细胞表型标志物表达水平明显低于预期，或分化能力丧失，则表明细胞系可能存在质量问题，需与供应商协商处理。