胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)是细胞代谢中的关键酶,催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸,同时生成 NADPH。CheKine? 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测试剂盒(微量法)以其精准、高效的检测性能,为科研人员提供了一种理想的工具,助力深入探究 ICDHc 在细胞代谢、氧化还原调控及疾病机制中的关键作用。
ICDHc 在细胞质中催化异柠檬酸脱氢脱羧反应,生成 α-酮戊二酸和 NADPH。NADPH 是细胞内重要的还原型辅酶,为脂肪酸、胆固醇等生物合成提供还原力,同时维持细胞的氧化还原平衡,抵御氧化损伤。
ICDHc 的活性受到多种因素的精细调控,包括底物浓度、 allosteric 效应和共价修饰等。在细胞应对氧化应激、快速增殖等生理状态时,ICDHc 活性上调,增加 NADPH 的生成,满足细胞的合成代谢和抗氧化需求。
ICDHc 提供的 NADPH 是细胞抗氧化防御系统的重要组成部分。在氧化应激条件下,ICDHc 活性增强,促进 NADPH 生成,为谷胱甘肽还原酶等抗氧化酶提供还原力,清除活性氧(ROS),减轻氧化损伤。ICDHc 功能缺陷可能导致细胞抗氧化能力下降,增加氧化损伤相关疾病的风险。
在糖尿病、肥胖症等代谢性疾病中,ICDHc 活性异常影响脂质代谢和胰岛素信号通路。研究表明,ICDHc 活性降低可能导致 NADPH 生成不足,影响脂肪酸合成和代谢调控,加剧胰岛素抵抗和脂毒性。
CheKine? 胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测试剂盒采用比色法原理,利用 ICDHc 催化异柠檬酸和 NADP?生成 NADPH。NADPH 在 340 nm 处具有特征性吸光度,通过分光光度计测量吸光度值的变化,即可定量评估 ICDHc 的活性。该试剂盒操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于多种生物样本,包括动植物组织、细胞培养物和血清等。
在氧化应激研究中,ICDHc 活性检测可用于评估细胞的抗氧化能力。例如,在研究氧化剂对细胞损伤模型的影响时,检测细胞中 ICDHc 活性发现,活性显著降低,表明氧化剂抑制了 ICDHc 的活性,导致 NADPH 生成减少,细胞抗氧化能力下降。通过抗氧化剂干预后,ICDHc 活性恢复,验证了抗氧化剂的保护作用。
在代谢性疾病研究中,ICDHc 活性检测可用于探究疾病机制和筛选药物。例如,在高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型中,检测肝脏组织中 ICDHc 活性发现,活性显著降低,伴随着脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗。通过使用代谢调节剂,ICDHc 活性恢复,脂质代谢和胰岛素敏感性得到改善,为代谢性疾病治疗提供了潜在策略。
对于动植物组织样本,需准确称量后,利用适当的缓冲液进行匀浆处理,确保细胞充分破裂释放 ICDHc。细胞培养物和细菌样本则需通过离心收集细胞,用预冷的缓冲液洗涤并制成匀浆。血清样本需避免溶血和反复冻融,以确保检测结果的准确性。
严格按照试剂盒说明书的操作步骤执行。首先将样本和标准品加入反应体系,随后依次加入检测试剂,包括异柠檬酸、NADP?和其他辅助试剂,充分混匀后在特定温度下孵育。孵育完成后,使用分光光度计在 340 nm 波长下测量吸光度值,并依据标准曲线计算 ICDHc 的活性。
每次检测应设置空白对照、阴性对照和阳性对照,以确保检测结果的准确性。对已知浓度的标准品进行重复检测,计算其变异系数(CV),一般要求 CV 控制在一定范围内,如小于 10%,以确保数据的稳定性和重复性。
目前市面上有多种 ICDHc 活性检测试剂盒,采用不同的检测原理,如比色法、荧光法等。CheKine? 试剂盒采用的比色法具有操作简便、成本较低、检测快速等优点,适合大多数实验室常规使用。荧光法具有更高的灵敏度和特异性,但需要配备荧光光度计。因此,在选择试剂盒时,应根据实验室设备条件、实验需求以及对检测灵敏度和速度的要求,综合考虑检测原理的适用性。
CheKine? 试剂盒适用于多种生物样本,包括动植物组织、细胞培养物和血清等。在购买前,务必仔细阅读试剂盒说明书,确保其与所检测的样本类型相匹配,以保证检测结果的准确性和可靠性。
试剂盒的灵敏度和检测范围是影响检测结果准确性的关键因素。CheKine? 试剂盒具有较宽的检测范围和较高的灵敏度,能够检测到样本中较低浓度的 ICDHc 活性变化。在选择试剂盒时,应了解其检测灵敏度和范围,并结合实验中预期的样本 ICDHc 活性水平进行选择。若试剂盒灵敏度不足,可能导致低浓度 ICDHc 样本的检测结果不准确或假阴性,从而影响对代谢状态或疾病机制的评估。
选择质量可靠、稳定性好的 ICDHc 活性检测试剂盒对于保证检测结果的准确性和重复性至关重要。在购买前,可通过查看试剂盒的用户评价、相关文献引用情况以及生产厂家的信誉和资质等信息,对试剂盒的质量和性能进行全面评估。CheKine? 作为知名品牌的试剂盒,经过严格的质量控制和性能验证,具有良好的稳定性和批次间一致性,能够为科研人员提供稳定可靠的检测结果。同时,注意试剂盒的保存条件和有效期,严格按照说明书要求进行保存和使用,以确保试剂的活性和性能不受影响。